[摘要] 采用超高液相色譜（UPLC）的方法，以Acquity BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm×150 mm，1.7 μm） ，流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，流速為0.3 mL·min^-1，柱溫45 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm的色譜條件同時(shí)測(cè)定白及藥材中的4-羥基苯基-葡萄糖苷、4-（葡糖糖氧基）-肉桂酸葡萄糖氧基芐酯、1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷、1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯、二氫菲5和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；鵠葡萄糖苷、 二氫菲1、芐基氫菲3和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂酰基-6-O-乙�；鵠葡萄糖苷9個(gè)指標(biāo)成分。各指標(biāo)成分之間分離度良好，在選定的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.999 3），平均加樣回收率（n=6） 為98.15%～102.2%，RSD為2.1%～3.6%，表明所建立的方法重復(fù)性、耐用性良好，結(jié)果準(zhǔn)確，經(jīng)對(duì)野生和人工種植白及藥材分析，野生白及所測(cè)定的9種成分含量高于人工栽培白及藥材，為白及藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　[關(guān)鍵詞] 白及；多指標(biāo)成分；超高液相色譜（UPLC）
　　[收稿日期] 2014-01-02
　　[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81360636）；貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開(kāi)發(fā)專項(xiàng)項(xiàng)目（黔科合中藥字[2010]5027號(hào)）；貴陽(yáng)市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目（筑科合同[2012204]20號(hào)）
　　[通信作者] 李勇軍，教授，主要研究方向天然藥物化學(xué)和中藥新藥研發(fā)，Tel：（0851）6908468，E-mail：gywam100@163.com
　　白及為蘭科植物白及Bletilla striata （Thund.） Reichb. f.的干燥塊莖，具有收斂止血，消腫生肌等功效[1]�，F(xiàn)代藥理研究表明，白及藥用功能廣泛，藥用價(jià)值高，具有止血，抗菌，抗腫瘤及促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)等藥理作用。另有研究發(fā)現(xiàn)白及正逐漸成為我國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)的重要原材料[2]。但目前白及藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)較薄弱，《中國(guó)藥典》2010年版一部和第二增補(bǔ)版僅收載了性狀、薄層色譜鑒別等[3]，無(wú)含量測(cè)定等重要的質(zhì)量控制指標(biāo)，因此難以評(píng)價(jià)和控制白及的質(zhì)量。作者在對(duì)白及的研究中，曾對(duì)白及的多糖和其中含量較高的化合物militarine{雙[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯}為指標(biāo)進(jìn)行了質(zhì)量控制研究[4-6]，而白及化學(xué)成分有芪類、聯(lián)芐類、菲類、聯(lián)菲類、聯(lián)菲醚類、菲并吡喃類、聯(lián)芐葡萄糖苷類、菲并螺甾內(nèi)酯類以及甾體、三萜和花色素苷類等化合物近50種[7-9]，以白及中單一指標(biāo)含量控制白及藥材質(zhì)量的方法，不能較全面的反映白及整體質(zhì)量信息。文獻(xiàn)報(bào)道白及水提物及甲醇提取物是白及止血及抗?jié)�瘍的有效部位[9]，國(guó)內(nèi)外對(duì)白及的質(zhì)量控制方法研究主要為多糖、總酚大類成分、單一成分（militarine， 肉桂酸）或某一類成分的分析報(bào)道[4-5，10-12]，未見(jiàn)同時(shí)測(cè)定白及藥材中4-（葡萄糖氧）芐醇及肉桂酸酯、2-異丁基蘋果酸酯、二氫菲和芐基氫菲類的多指標(biāo)成分的報(bào)道。本研究以白及中分離到的含量較高化合物，應(yīng)用超高液相色譜法，建立了同時(shí)測(cè)定白及中9個(gè)指標(biāo)性成分的分析方法，為白及藥材的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。
　　1 材料
　　Acquity UPLC（美國(guó)沃特世公司，包括二元梯度泵、真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱溫箱、陣列二極管檢測(cè)器、Empower 2工作站）；TGL-16G高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；1/10萬(wàn)電子天平（AE240，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；超純水機(jī)（四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）。
　　白及藥材由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)與藥用植物學(xué)教研室龍慶德副教授鑒定為蘭科植物白及B. striata的干燥塊莖。4-羥基苯基-葡萄糖苷（4-hydroxymethylphenyl β-D-glucoside）；4-（葡糖糖氧基）-肉桂酸葡萄糖氧基芐酯（blestroside）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-葡萄糖苷（dactylorhin A）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯（militarine）；二氫菲5（dihydrophenanthrene 5）；1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；鵠葡萄糖苷（gymnoside V）；二氫菲1（dihydrophenanthrene 1）；芐基氫菲3（benzylphenanthrene 3）和1，4-二[4-（葡萄糖氧）芐基]-2-異丁基蘋果酸酯-2-[4-O-肉桂�；�-6-O-乙�；鵠葡萄糖苷（gymnoside Ⅸ）由本實(shí)驗(yàn)室從白及藥材中分離得到，經(jīng)¹H，¹³ C-NMR，MS，UV和 IR鑒定，TLC純度檢查顯示單一斑點(diǎn)，UPLC-PDA在多個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)，峰面積歸一化含量均大于98%；乙腈（色譜純，美國(guó)TEDIA有限公司，批號(hào)AS1122-001），甲酸（美國(guó)TEDIA有限公司，批號(hào)FS0630-020），甲醇（分析，上海振興化工一廠，批號(hào)200909061），純凈水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司，批號(hào)20120722）。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件
　　ACQUITY BEH C₁₈色譜柱（2.1 mm× 150 mm， 1.7 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-水（B）；流速0.3 mL·min^-1；梯度洗脫（0～10 min，5%～16% A；10～24 min，16%～30% A；24～27 min，30%A；27～32 min，31% A；32～33 min，31%～37% A；33～45 min，37%～55% A；45～46 min，55%～100% A）；柱溫為45 ℃，陣列二極管檢測(cè)器（PDA），檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，進(jìn)樣量2 μL。

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