采用茚三酮比色法測(cè)定茶葉中游離氨基酸總量。確定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋沸水浴15min加熱，冷卻后蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。所得線性方程A=4.312X-0.017，相關(guān)系數(shù)r=0.99955，回收率達(dá)到92.2%左右，精確度為0.8%，試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。
　　茶葉 游離氨基酸 茚三酮比色法茶葉中游離氨基酸含量是用來描述茶葉鮮爽程度的一個(gè)重要品質(zhì)指標(biāo)，還是人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同事對(duì)人體疾病的康復(fù)和預(yù)防起著極重要的保健作用。測(cè)定茶葉中游離氨基酸含量對(duì)茶葉的開發(fā)利用具有一定的指導(dǎo)意義。以谷氨酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度計(jì)為測(cè)定儀器，探索一種適合于茶葉游離氨基酸含量的分析方法。本試驗(yàn)對(duì)該方法的主要影響因素，精密度和回收率等進(jìn)行研究，確定了茶葉中游離氨基酸總量的測(cè)定方法。
　　1材料與方法1.1儀器和用具數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋，型號(hào)電子分析天平：感量為0.0001g，型號(hào)紫外可見分光光度計(jì)�？烧{(diào)式電爐。1.2試劑和溶液所用試劑應(yīng)為分析純（AR），水為蒸餾水。PH8.0磷酸鹽緩沖液：1/15mol/L磷酸氫二鈉溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液5ml，混勻。2%茚三酮溶液：稱取水合茚三酮（純度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亞錫攪拌均勻。分次加少量水溶解，放在暗處，靜置一晝夜，過濾后加水定容至100ml。1.3試驗(yàn)方法1.3.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取100mg谷氨酸（純度不低于99%）溶于100ml水，定容作為母液。（1ml含谷氨酸1mg）。配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用GB/T8314-2002中茶游離氨基酸的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。1.3.2樣品處理稱取3g（精確到0.0001g）粉碎混合均勻過60目篩樣品于500ml的錐形瓶中，加450ml煮沸的蒸餾水，沸水浴浸提45min，每10min震搖一次，減壓過濾至500ml容量瓶中，殘?jiān)�用熱蒸餾水洗滌2-3次，冷卻，定容。
　　2結(jié)果與討論2.1反應(yīng)條件加水與不加水的比較本試驗(yàn)選擇反應(yīng)條件加水和不加水兩種標(biāo)準(zhǔn)系列的比較：分別吸取兩組0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL濃度0.1mg/ml谷氨酸工作液于一組25mL容量瓶中，一組加水4ml，另一組水4ml再分別加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液+0.5ml2%茚三酮溶液，沸水浴15min加熱，冷卻蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。試驗(yàn)結(jié)果顯示加水的標(biāo)準(zhǔn)系列顯色效果不理想，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性很差。而不加水的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9991。
　　2.2標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度的選擇本試驗(yàn)通過對(duì)配制的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml）測(cè)定加標(biāo)回收率進(jìn)行比較。本實(shí)驗(yàn)分別選取4份茶粉一份作為本底，另3份加入不同量的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行樣品處理。取1ml的茶湯測(cè)定其游離氨基酸總量作為本底量，另3份分別內(nèi)含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加標(biāo)量。按GB/T8314-2002方法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明0.1mg/ml和0.2mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的回收率比較高，但是考慮到有的樣品吸光度高超出標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以選取0.2mg/ml濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液最合適。而0.3mg/ml、0.4mg/ml濃度繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)逐漸降低，高濃度的比色效果不好，導(dǎo)致回收率低。
　　2.3加熱方式的選擇本試驗(yàn)選擇兩種加熱方式：數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋、可調(diào)節(jié)式電爐。本實(shí)驗(yàn)選取4份茶粉一份作為本底，另3份加入不同量的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行樣品處理。取1ml的茶湯測(cè)定其游離氨基酸總量作為本底量，另3份分別內(nèi)含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加標(biāo)量。按GB/T8314-2002方法測(cè)定分別在數(shù)顯
　　電熱恒溫水浴鍋和可調(diào)式電爐加熱的沸水浴中加熱15min來比較回收率。結(jié)果見表2，可以看出數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋加熱的平均回收率最高達(dá)到92.8%。而可調(diào)式電爐加熱法回收率為81.9%。且在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)可調(diào)式電爐沸水浴加熱放置不便易造成受熱不均的情況影響，導(dǎo)致還原茚三酮與氨及另一分子茚三酮的縮合反應(yīng)不完全。2.4測(cè)定方法的精確度分別以同一加標(biāo)的樣品重復(fù)比色測(cè)定5次，計(jì)算游離氨基酸總量，結(jié)果見表3。RSD為0.80%，平均回收率為92.2%，表明本方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。
　　3結(jié)論采用茚三酮比色法測(cè)定茶葉中的游離氨基酸總量，采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸鹽緩沖液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋沸水浴15min加熱，冷卻后蒸餾水定容至25ml，在570nm處測(cè)定吸光度。方法的變異系數(shù)小于0.80%，加標(biāo)平均回收率為92.2%，本方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好。
　　參考文獻(xiàn)：
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