摘要：目的：建立斑花黃堇中總黃酮的提取和定性定量方法。方法：應用酸提堿沉法制備藏藥材斑花黃堇中不同 pH 梯度下不同極性的有機溶劑二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇生物堿浸膏; 用六種生物堿沉淀試劑對所制備的八種生物堿浸膏進行定性分析; 用標準品鹽酸小檗堿制作標準品溶液的標準曲線，采用紫外分光光度法測定所提取樣品溶液中生物堿成分的含量。結果：鑒定并測定出6個不同產地樣品中生物堿成分的相對含量在0.49%～1.18%。 結論：通過本研究可穩(wěn)定提取、定性并定量檢測出藏藥材斑花黃堇中生物堿成分的相對含量，該方法方便可行。
　　關鍵詞：斑花黃堇;提取;總生物堿;定性鑒別;含量測定
　　【中圖分類號】R574 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2018）06-147-03
　　斑花黃堇 Corydalis conspersa Maxim.，別名：甘冬歐薷（西藏藏藥材名），為罌粟科紫堇屬多年生草本植物，產于甘肅西南部、青海中南部、四川西北部和西藏東部和中部，是生長在海拔4300m 以上高寒流石灘中的青藏高原特色藥用植物，全草用于治療瘟疫病燒傷、赤巴�。嶙C）等，是重要的寒性藏藥藥材^[1-2]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，罌粟科紫堇屬植物具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗焦慮、保肝、殺蟲、抗腫瘤等活性^[3-4]。研究采用酸提堿沉法提取并用有機溶劑萃取藏藥材斑花黃堇中的生物堿類成分^[5-8];通過生物堿鑒別試劑和通用的化學試劑對萃取的生物堿成分進行定性分析^[9];應用鹽酸小檗堿標準品制作標準曲線紫外分光光度法來檢測藏藥材斑花黃堇中相對總生物堿的含量^[10]，對該品種的進一步研究和開發(fā)具有重要的意義。
　　1 儀器及實驗材料
　　1.1 儀器
　　AL204電子天平（梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司）
　　XB-5200B超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）
　　AYALA旋轉蒸發(fā)儀N-1100（上海愛朗儀器有限公司）
　　UV-2450 紫外-可見分光光度計（島津公司）
　　GZX-9096MBE數(shù)顯鼓風干燥箱（上海博弈實業(yè)有限醫(yī)療設備廠）
　　1.2 實驗材料
　　1.2.1 藥材
　　斑花黃堇植物于2017年8月采自青海省黃南州吉崗山^[11]，經青海民族大學藥學院林鵬程教師鑒定為罌粟科紫堇屬藥材斑花黃堇，清洗陰干后粉碎備用。
　　1.2.2試劑
　　鹽酸小檗堿對照品（質量分數(shù)>98.5%，采購于中國藥品生物制品鑒定所）
　　鹽酸、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇、無水乙醇、氨水、氫氧化鈉、苦味酸、 鉬酸銨、碘-碘化鉀、碘化鉍鉀、濃硫酸、濃硝酸等試劑，均為分析純
　　2生物堿浸膏的制備及鑒定方法和結果
　　2.1 制備方法及百分得率結果分析
　　應用 0.5%鹽酸浸泡藏藥材斑花黃堇藥材細粉（過 80 目篩）， 超聲提取三次， 每次 30 分鐘， 然后抽濾并合并濾液后， 用濃氨水、 2%氫氧化鈉調至不同 pH 值（pH8-9， pH10-11， pH12-13）， 靜置過夜后， 用二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取堿性水液體， 獲得不同 pH 值及不同極性的生物堿部位， 將各個部位的萃取液在旋轉蒸發(fā)儀上濃縮并回收有機溶劑， 將濃縮后的不同 pH 值及不同極性的生物堿萃取液體放置燒杯中揮發(fā)至干， 獲得不同極性的生物堿浸膏，稱取重量，與總藥材重量相比并乘以100%計算其百分得率。結果如表1所示，可看出：PH8～9，二氯甲烷萃取回收后總生物堿的重量得率為0.43%，最多的部分，乙酸乙酯部分得率最低，為0.19%;不同PH值，用二氯甲烷萃取部分的重量相對較多。
　　2.2 生物堿浸膏的鑒別反應
　　2.2.1 鑒別試劑的配制
　�。�1）改良碘化鉍鉀溶液的配制方法
　　取次硝酸鉍 0.85g，加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，加碘化鉀溶液（4→10） 20ml ，搖勻，即得，5 克硅鎢酸溶于100 毫升水中，加鹽酸至PH2左右。
　　（2）碘-碘化鉀試劑的配制方法化學試劑的配制方法
　　碘酒的配方如下：碘 25g，碘化鉀10g，乙醇：500mL;水：加至1000mL 配制時應先將碘化鉀溶解于10mL 水中，配成飽和溶液。 再將碘加人碘化鉀溶液中然后加入乙醇， 攪拌溶解后，添加蒸餾水至1000mL。
　�。�3） 苦味酸試劑：1.5g 苦味酸溶于100ml 蒸餾水。
　�。�4） 鉬酸銨-濃硫酸配制方法
　　準確稱取5g鉬酸銨，先用少量水溶解，然后移入100ml的容量瓶中，逐漸加水至 100ml 刻度線，混勻即可。如果需要其他體積按比例增加或縮小即可。
　　（5） 濃硝酸：原裝試劑，含量大于68%。
　　（6） 濃硫酸：原裝試劑，含量大于98%。
　　2.2.2 鑒別反應方法
　　生物堿類成分均與多種生物堿沉淀試劑在酸性溶液（水液或稀醇液） 中產生沉淀反應。 取浸膏約 100mg， 加溶劑溶解， 依次分別滴加苦味酸試劑、鉬酸銨-濃硫酸、碘-碘化鉀、改良的碘化鉍鉀試劑、濃硝酸、濃硫酸數(shù)滴，觀察顏色、氣味、 沉淀等現(xiàn)象并拍照記錄，對反應現(xiàn)象匯總如表2所示。
　　2.2.3鑒別反應匯總及分析
　　根據(jù)2.2.2鑒別反應的現(xiàn)象歸納如表2所示，可看出二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇各個部分均跟生物堿沉淀試劑和濃硝酸、濃硫酸有不同顏色的沉淀反應和褐化反應，大多為黃棕色、黑色、酒紅色沉淀和溶液。
　　通過表2，可看出PH8～9二氯甲烷部分有明顯顏色的生物堿沉淀反應，PH11乙酸乙酯有顏色，有些有沉淀，有些沒有沉淀，PH12～13有顏色，有些有沉淀、有些沒有沉淀，說明均不同程度的含有生物堿成分。

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