【摘 要】 目的：研究并建立遵義白及藥材HPLC指紋圖譜識別方法，方法：采用HPLC色譜法，建立指紋圖譜識別共有模式。結(jié)果：建立白及藥材HPLC指紋圖譜識別方法，并對不同產(chǎn)地的白及和白及對照藥材進(jìn)行相似度比較，HPLC指紋圖譜標(biāo)定為13個(gè)共有峰，10批不同產(chǎn)地白及藥材相似度均大于0.95，3批知母藥材相似度均小于0.20。結(jié)論：白及藥材HPLC指紋圖譜具有重復(fù)性好、特征性強(qiáng)、方法簡便等特點(diǎn)，可用于白及的有效鑒別。
　　【關(guān)鍵詞】 遵義白及；知母；HPLC；指紋圖譜
　　【中圖分類號】R282.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）15-0024-03
　　Abstract：Objective The HPLC fingerpint for the identification of Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.Methods The mutual mode to HPLC fingerprints was set up. Results HPLC fingerprints was set up， and the 13 common peaks were obtaingd.The similarities adulterants samples were all above 0.95， adulterant samples were less than 0.20. Conclusion The method is simple，stable，and reproducible，which can be used to identify Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.
　　Keywords：Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f；Anemarrhena Asphodeloides Bge；TLC ；Fingerprints
　　白及為蘭科植物白及Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.干燥的塊莖[1]，具有收斂止血、消腫生肌功效、用于咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒。知母為為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.干燥的塊莖，白及和知母藥材外形極為相似，特別炮制為飲片后，由于白及與知母在價(jià)格上有極大的差異，在民間人們用知母冒充白及藥材和白及飲片銷售的例子越來越多。筆者采用白及對照藥材作為參照，建立HPLC指紋圖譜共有模式，為白及藥材快速識別提供參考。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器 Agilent LC-1260高效液相色譜議（包括四元泵，DAD，柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器，工作站），AB204-S型梅特勒電子天平，KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。
　　1.2 試劑與材料 乙睛色譜純，娃哈哈純凈水，硅膠G薄層板（購于青島海洋化工有限公司），其它試劑均為分析純，白及對照藥材（批號：121262-201405，中國食品藥品檢檢驗(yàn)研究院）。白及和知母藥材，采集于貴州省遵義各地區(qū)，白及經(jīng)遵義市食品藥品檢驗(yàn)所鄧順超副主任中藥師鑒定為蘭科植物白及（Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.干燥的塊莖，知母為為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.干燥的塊莖，樣品來源見表1。
　　2 方法和結(jié)果
　　2.1 指紋圖譜建立[3-6]2.1.1 色譜條件 色譜柱：Aglent C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B）進(jìn)行線性梯度洗脫，0～10min，5%A～10% A，10～15min，10%A～20%A，15～35min，20%A～30% A，35～45min，30%A～10% A；45～50min，10%A～5% A，體積流量：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：225nm；運(yùn)行時(shí)間：50min；進(jìn)樣量為10μL。所有組分在50min內(nèi)出峰完畢。
　　2.1.2 對照藥材溶液制備 取對照藥材約1.0g，精密稱定，加甲醇20mL，稱其重量，超聲處理50min，取出，放置室溫，用甲醇補(bǔ)足重量，取續(xù)濾液，即得。
　　2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取白及藥材粉末（過2號篩）1.0g，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，即得。
　　2.1.4 方法學(xué)考察
　　2.1.4.1 精密度 取同一供試品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測得各共有指紋峰相對保留時(shí)間的RSD為1.0%，結(jié)果表明儀器精密度好。
　　2.1.4.2 重復(fù)性 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，以對照藥材為參照，共有特征峰相對保留時(shí)間的RSD為1.8%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。
　　2.1.4.3 穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測得各共有特征峰相對保留時(shí)間的RSD為1.3%，結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.1.5 共有指紋圖譜峰的標(biāo)定 根據(jù)11批白及供試品溶液和1批對照藥材溶液和3批混淆品知母溶液的HPLC法測定結(jié)果，以白及對照藥材為參照，比較其色譜圖（見圖2、圖3、圖4），以對照藥材為參照，共有峰的保留時(shí)間和共有峰面積標(biāo)定共有峰13個(gè)，結(jié)果表明共有峰的保留時(shí)間RSD小于1.0%，符合指紋圖譜的要求。HPLC指紋圖譜13個(gè)共有峰保留時(shí)間和峰面積，見表2。
　　3.6 相似度計(jì)算 采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)軟件2004年A版計(jì)算出10批次的白及與1批對照藥材和3批知母HPLC指紋圖譜的相似度，與共有模式相比較，結(jié)果見表3。
　　3 討論
　　通過建立該指紋圖譜，對10批白及和1批對照藥材和3批混淆品知母藥材HPLC圖譜進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10批白及藥材HPLC圖譜的共有峰保留時(shí)間、相對峰面積非常吻合，與對照藥材共有模式R比較，相似度均大于0.95。由此可以確定這10批見白及藥材質(zhì)量較為一致，這與藥材來源相吻合。共有峰峰面積相差較大外，這可能是藥材生長環(huán)境因素影響，而3批知母藥材相似度均小于0.20。
　　本法簡便、快速，準(zhǔn)確度高，特征性強(qiáng)等特點(diǎn)，可用于白及藥材的質(zhì)量控制和識別，同時(shí)為遵義白及藥材和混淆品知母藥材鑒別和質(zhì)控制提供科學(xué)依據(jù)。
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