[摘要]采用硅膠柱、ODS開放柱和半制備液相等色譜方法相結(jié)合，從千年健根莖乙醇提取物中的乙酸乙酯部位分離得到1.2個(gè)倍半萜類化合物，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜分析，化合物結(jié)構(gòu)分別鑒定為 3α，7αdihydroxycadin4ene （1），3oxofabiaimbricatan （2），3β，4αdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （3），integrifonol A （4），1β，6βdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （5），4β，7β，1.1enantioeudesmantriol （6），epiguaidiol （7），oplopanone （8），（-）1β，4β，6αtrihydroxyeudesmane （9），2αhydroxyhomalomenol （10），（-）Tmuurolol （1.1），hamalomenol A （1.2）。 化合物1～7為首次從千年健屬植物中分離得到，1.1～1.2為首次從該植物中分離得到。此外對(duì)分離的部分化合物進(jìn)行了抑制脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW 2.64.7細(xì)胞NO釋放實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)化合物3，5和8有良好的抑制活性，其IC50分別為65.1，3.2.5，778 μmol·L-1。
　　[關(guān)鍵詞]天南星科； 千年健屬； 千年��； 化學(xué)成分； 抗炎
　　千年健，又稱一包針、千顆針、千年見、絲棱線等，為雙子葉植物天南星科千年健屬植物千年健Homalomena occulta （Lour） Schott，產(chǎn)于廣東、海南、廣西、云南等地。根莖入藥，是中國藥典收載品種，為瑤族群眾所習(xí)用，可治跌打損傷、骨折、外傷出血、四肢麻木、筋脈拘攣、風(fēng)濕腰腿痛、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、胃痛、腸胃炎、痧癥等疾病[12]。近年來，該藥材的化學(xué)成分已有一些研究報(bào)道，主要含有倍半萜類化合物、酚酸類等化合物[37]。為進(jìn)一步闡明該藥材的化學(xué)成分，尋找抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥效成分，對(duì)千年健的根莖乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到1.2個(gè)倍半萜類化合物，分別為3α，7αdihydroxycadin4ene （1），3oxofabiaimbricatan （2），3β，4αdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （3），integrifonol A （4），1β，6βdihydroxy7epieudesm1.1（1.3）ene （5）， 4β，7β，1.1enantioeudesmantriol （6），epiguaidiol （7），oplopanone （8），（-）1β，4β，6αtrihydroxyeudesmane （9），2αhydroxyhomalomenol （10），（-）Tmuurolol （1.1），hamalomenol A （1.2）。 化合物1～7為首次從千年健屬植物中分離得到，1.1～1.2為首次從該植物中分離得到。此外，對(duì)分離的部分化合物進(jìn)行了抑制脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞 RAW 2.64.7的NO釋放實(shí)驗(yàn)，篩選具有抗炎活性的化合物。
　　1 材料
　　INOVA500MHzFT核磁共振儀，TMS為內(nèi)標(biāo)物；Agilent 63.20型ESI質(zhì)譜儀；Waters 1.5.2.5半制備型高效液相色譜儀（2.998 PDA檢測器）；Agilent XDB C1.8色譜柱（94 mm× 2.50 mm， 5 μm），超純水儀（MilliporeQ），暗箱式紫外分光儀（WD9403C型），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA 1000），Thermo 3.1.11型二氧化碳培養(yǎng)箱（美國熱電公司），Motic AE2000倒置熒光顯微鏡，TELSTAR AV30型超凈工作臺(tái)，Thermo Multiskan FC多功能酶標(biāo)儀。薄層色譜和柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）柱色譜材料（安捷倫）；薄層色譜和柱色譜用石油醚（60～90 ℃）、丙酮、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇等試劑為分析純，液相用甲醇為色譜純（Fisher公司產(chǎn)品），水為MilliQ純化水。DMEM培養(yǎng)基（Hyclone，美國）；胎牛血清（Gibco，美國）；NO化學(xué)法試劑盒（南京建成生物工程有限公司）；槲皮素對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院）。
　　小鼠巨噬細(xì)胞RAW 2.64.7細(xì)胞系購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。
　　千年健藥材201.3年7月采購于廣西玉林藥材市場（產(chǎn)地廣西桂林），經(jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院天然藥物學(xué)系屠鵬飛教授鑒定為天南星科千年健屬植物千年健H occulta的干燥根莖，標(biāo)本（QNJ201.30701）保存于華僑大學(xué)化工與制藥工程系標(biāo)本庫。
　　2 提取與分離
　　干燥千年健根莖200 kg，粉碎后用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取3次，合并3次提取液，減壓濃縮得浸膏。取浸膏加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物3.20 g，乙酸乙酯萃取物1.10 g，正丁醇萃取物60 g。乙酸乙酯部分（100 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿甲醇（10∶0～10∶5 ）梯度洗脫，TLC檢測后主斑點(diǎn)一致或相近的合并，共得10個(gè)組分（Fr1～Fr10）。Fr1（5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脫，得4個(gè)流分（Fr1.1～Fr1.4）；其中Fr1.2依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶1梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（甲醇水，5.5%甲醇）分離得到化合物1 （105 mg）和2 （50 mg）；Fr1.3依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶3梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（5.2%甲醇）分離得到化合物3 （87 mg），4 （1.20 mg），5 （5.2 mg）。Fr1.4經(jīng)硅膠柱色譜，依次經(jīng)RPC1.8反相柱（甲醇水，6∶4～9∶3梯度洗脫），再經(jīng)半制備液相（50%甲醇）分離得到化合物6（100 mg）和7 （4.5 mg）。Fr4（1.2 g）以石油醚丙酮（1.5∶1～0∶1）梯度洗脫，得6個(gè)流分（Fr4.1～Fr4.6）；其中Fr4.2經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚丙酮，20∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物8 （100 mg）；Fr4.4經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚丙酮，10∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物9 （1.2.5 mg）和10 （50 mg）；Fr4.5經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚乙酸乙酯，5∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物1.1 （1.5.5 mg）；Fr4.6經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚乙酸乙酯，5∶1～0∶1梯度洗脫），分離得到化合物1.2 （85 mg）。

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