【摘 要】 采用微波灰化、固相萃取和高效液相色譜的方法對茶葉樣品中的鉻進行了測定分析。實驗結(jié)果表明灰化過程通過程序升溫的方法能得到良好的效果，在二苯卡巴肼溶液和磷酸溶液中，鉻能和顯色劑形成穩(wěn)定的絡合物，此絡合物可被Sep-Pak C18的小柱吸附富集，使用5mL～10mL丙酮可完全洗脫，富集倍數(shù)可達到10倍。洗脫的樣品在Eclipse XDB-C18（5μm，4.6×150mm）柱上，以丙酮和磷酸鹽緩沖溶液為淋洗液，檢測波長為543nm下分離測定，樣品中鉻的檢出線可達到2ng。實驗表明此方法在茶葉樣品的測定中能得到良好的效果。
　　【關(guān)鍵詞】 科技創(chuàng)新 技術(shù)標準
　　近幾年來，全國市場上屢次出現(xiàn)用鉛鉻綠染色過的假冒偽劣茶葉，用這種顏料只要很少的分量，就可以讓茶葉變色。但樣品按傳統(tǒng)合成色素的檢測方法無法檢出。國內(nèi)對鉛鉻綠的檢測研究報道也很少。由于鐵藍在鉛鉻綠中的比例無法確定（5%～45%不等），因此可以鉛鉻綠中的鉛鉻黃含量的高低表征鉛鉻綠含量的高低，即試樣中鉛鉻綠的含量可以鉛鉻黃計。由于直接測定鉻酸鉛含量的難度很大，可通過測定樣品中的鉛、鉻來間接測定。從已知文獻中可知茶葉中一般都含有鉛，比鉻的含量要高，因此鉻含量是樣品中比較敏感的物質(zhì)。若鉻含量低于已知茶葉樣品的本底值，則可以肯定試樣中不含鉻酸鉛，也就不含鉛鉻綠；如試樣中檢出超過本底值最高鉻含量，試樣中可能添加了鉛鉻綠。目前國內(nèi)外六價鉻檢測的標準方法均采用分光光度法，二苯碳酰二肼發(fā)生氧化還原反應產(chǎn)生的物質(zhì)能生成穩(wěn)定的紫紅色絡合物。由于該體系穩(wěn)定，干擾少，顯色反應選擇性高，大多數(shù)的離子干擾都不大。由于茶葉中鉻的本底濃度低，基體干擾大，通常需要事先進行富集才能達到滿意的效果。進入20世紀80年代，將HPLC與分光光度法聯(lián)用，突破了靈敏度和選擇性難以統(tǒng)一的矛盾，形成了高效液相色譜光度法，在無機痕量分析中有了廣泛的應用。因而本試驗采用固相萃取分離富集技術(shù)和高效液相色譜法提出了一種方便、快速地分析茶葉樣品中鉻的分析方法。不僅可消除各種干擾，而且還大大提高檢測靈敏度。
　　1 試驗部分
　　1.1主要儀器和試劑
　　Cr標準儲備溶液：100mg/L；Cr標準工作溶液：1.0mg/L，吸取一定量的Cr標準儲備液，用水稀釋而成；二苯碳酰二肼溶液：2.5g/L；70%磷酸溶液；丙酮；pH2.5 10mmol磷酸氫二鉀；試驗用水為高純水。
　　液相色譜：Agilent technoligies 1000 series；固相萃取裝置：agela負壓16通道；微波灰化爐：CEM Phoenix Standard Unit。
　　1.2試驗方法
　�。�1）樣品前處理
　　稱取研磨的茶葉粉末10g左右（精確到0.001g）于50ml瓷坩堝中，在電爐上低溫碳化（110℃～130℃）后，置于灰化爐中，10℃/min逐步升溫，至500℃，并保持在500℃下干灰化處理1h，后以20℃/min升溫至800℃，保持2h，至樣品完全灰化，呈灰白色為止。試劑空白同時操作�；以诶鋮s后用少量蒸餾水濕潤，再加入2mol/L鹽酸，在電爐上低溫溶解（如無法完全溶解的可加入幾滴30%過氧化氫溶液），然后用蒸餾水定容10mL容量瓶中，待測，同時做試劑空白[8]。
　�。�2）柱前衍生
　　移取1mL待測液于50mL容量瓶中，加入蒸餾水大約30mL，再加入1mL二苯卡巴肼溶液及1mL磷酸溶液，最后用蒸餾水稀釋到刻度，混勻。靜止20分鐘后進行測定。
　�。�3）固相萃取富集
　　衍生后的溶液以2.0mL/min速度通過Sep-PakC18柱。用5mL～10mL丙酮溶液洗脫吸附在柱上的二苯偶氮碳酰肼的絡合物，后以丙酮定容至10mL。
　　（4）色譜測定
　�。�5）色譜條件和參數(shù)表
　　表1 色譜條件和參數(shù)
　　按照上述色譜條件下的色譜圖見圖1，圖中6.39分鐘的峰為鉻的衍生產(chǎn)生物的色譜峰。
　　圖1 衍生后色譜圖
　　2 結(jié)果與討論
　　2.1工作曲線及檢出限
　　配置一系列不同濃度的六價鉻標準溶液，按1.2.2測定。將色譜峰面積（或峰高）對六價鉻濃度作圖2，得到標準曲線。
　　表2 標準工作曲線
　　圖2 標準工作曲線 圖3 標準工作曲線
　　由圖2和圖3可得到標準曲線方程為：
　　H=0.6259×C+0.3759 復相關(guān)系數(shù)為0.9993
　　A=14.962×C+11.152 復相關(guān)系數(shù)為0.997
　　從圖表和回歸分析可以看出，無論使用峰面積還是峰高對濃度進行回歸都可以得到良好的線性關(guān)系。
　　高效液相色譜法測定茶葉中的六價鉻，靈敏度較高，檢測低限為0.2μg/50mL，相當于2mg/Kg樣品。從資料和文獻來看，大部分的茶葉樣品中的鉻的本底值基本上都小于2mg/Kg，因此為了測定的準確性，要進行樣品的濃縮富集處理。
　　2.2固相萃取富集條件
　　Sep-PakC18固相萃取小柱為反相柱，小柱對無機離子與試劑生成的絡合物的萃取可用疏水締合原理解釋，二苯碳酰二肼與Cr生成的絡合物具有一定的疏水性，以水溶液通過小柱時能富集在柱上，改用少量溶劑強度大的溶劑（乙醇、乙腈、丙酮等）洗脫就能把絡合物洗下而達到富集目的。
　　試驗表明，用5mL的丙酮以2.0mL/min的流速可把小柱上富集的絡合物和試劑能完全洗下，因此試驗選用10mL的丙酮洗脫至10mL容量瓶中，用丙酮定容，以相應的試劑空白做參比，液相色譜進行測定。
　　2.3穩(wěn)定性和重現(xiàn)性
　　目標絡合物的穩(wěn)定性以及在色譜過程分析中的重現(xiàn)性對測定數(shù)據(jù)的準確性至關(guān)重要。因此將一個標準溶液按上述方法進行測定，并相隔一定時間后重復進樣，結(jié)果見表3。由表3可以看出：在10小時以內(nèi)，目標化合物很穩(wěn)定，方法重現(xiàn)性好。
　　表3 衍生物的穩(wěn)定性
　　把吸附有Cr-二苯偶氮碳酰肼絡合物的Sep-PakC18放置于避光處，在室溫下，分別在10min、1h、2h測定有色絡合物的吸光度和色譜分析，結(jié)果表明，吸附在Sep-PakC18上的有色絡合物在2h內(nèi)能夠保持穩(wěn)定。從SPE-PakC18柱上洗脫下來的樣品的色譜圖，見圖4。由圖可見衍生物能很好的被富集，其他的組分基本上保持原來的峰高，沒有太大的變化。
　　圖4 富集后樣品色譜圖
　　2.4干擾消除
　　因此采用高效液相色譜法測定茶葉中的六價鉻，以二苯基碳酰二肼作為衍生劑，選擇性高，Cu2+、Zn2+、Cr3+、Al3+等金屬離子的干擾都不大。Fe3+雖可與二苯基碳酰二肼作用成黃棕色絡合物，但在樣品分離分析過程中采用磷酸氫二鉀作緩沖溶液，F(xiàn)e3+與PO43-生成穩(wěn)定的無色絡合物，從而消除了Fe3+的干擾。在對樣品進行柱前衍生后，不同組分經(jīng)色譜柱分離后，按流出的順序先后到達檢測器。只要檢測條件合適，不同組分能有效分離，則各種干擾就可消除。
　　2.5實際樣品分析
　　圖5 含美術(shù)綠綠茶衍生色譜圖
　　由圖5可見實際樣品測定中的復雜成分基本上對測定沒有什么干擾。
　　由于鉛鉻綠屬于茶葉中禁止添加的物質(zhì)，故在進行回收率試驗時選擇了方法測定低限及使茶葉呈不同程度綠色的三個濃度水平的鉻酸鉛進行添加，結(jié)果見表4。從實驗數(shù)據(jù)看，方法的回收率、精密度試驗結(jié)果滿足測定要求。
　　3 結(jié)論
　　●樣品前處理方法，采用灰化方法，能夠很好地消解樣品；
　　●使用二苯碳酰二肼作為螯合劑，具有良好的絡合效果和選擇性，同時具有良好的穩(wěn)定性，能滿足測定的要求；
　　●本研究選用博納艾杰爾Cleanert ODS C18（封端）為固相萃取柱，能夠很好地富集衍生產(chǎn)物，同時能對樣品有很好的凈化作用；
　　●衍生物具有良好的穩(wěn)定性；
　　●實驗結(jié)果表明通過固相萃取和高效液相色譜能很好地消除樣品中的干擾；
　　●在高效液相色譜上采用丙酮和磷酸氫二鈉和磷酸緩沖溶液為流動相，采取梯度淋洗的方法能得到滿意的分析效果。

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