【摘要】目的 測(cè)定不同產(chǎn)地野生中藥材明黨參中膽堿的含量。方法 本文采用硝酸加熱回流分解提取，濾液用40%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)至PH至9～10，加入過量甲醇，冰箱放置過夜，濾液濃縮后加入雷氏銨鹽甲醇溶液，生成粉紅色片狀結(jié)晶，丙酮溶解后定容至25 mL容量瓶中，吸取5 mL至25 mL容量瓶后于520 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果 不同產(chǎn)地野生藥材中膽堿的含量分別為江蘇南京幕府山37.78%，句容天王鎮(zhèn)虎山57.03%，句容茅山41.98%，南京青龍山60.74%，南京紫金山38.20%，南京老山33.99%，安徽滁州32.79%，安徽安慶57.38%，安徽青陽36.16%，浙江杭州38.96%。結(jié)論 可看出不同產(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的含量在32.79%～60.74%之間，其中以江蘇南京青龍山、安徽安慶、江蘇句容天王鎮(zhèn)虎山中膽堿的含量較高。
　　【關(guān)鍵詞】明黨參；膽堿；含量測(cè)定
　　【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2018.30..02
　　明黨參（Radix Changii）為傘形科明黨參屬單種植物明黨參（Changium smyrnioides Wolff.）除去栓皮的干燥根。主產(chǎn)于江蘇、安徽、浙江等地。具有補(bǔ)氣生津、潤(rùn)肺化痰、平肝和胃的功效[1]。陳建偉等[2]從明黨參中首次分得膽堿[3-4]，一種抗脂肪肝因子的有效成分，分離提取后利用雷納克鹽法通過測(cè)定氯化膽堿的含量來定量膽堿的相對(duì)含量[5]。
　　1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
　　1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
　　明黨參藥材采集于野生地及購于安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)秦民堅(jiān)教授鑒定為傘形科明黨參Changium smyrnioides Wolff.的干燥根。
　　1.2 試劑
　　氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)品購于中國(guó)藥品生物制品鑒定所；雷氏鹽：Sigma Aldrich of D-89552/Fluka chemie；硝酸（南京化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)），甲醇（江蘇漢邦科技有限公司生產(chǎn)），正丙醇（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）；氫氧化鈉（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)），丙酮（天津市博迪化工有限公司生產(chǎn)）。
　　1.3 儀器
　　水浴鍋（國(guó)華電器有限公司生產(chǎn)）；循環(huán)水式真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司生產(chǎn)）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)）；UV-2501可見分光光度計(jì)（日本島津公司生產(chǎn)）。
　　2 實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1 氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)液的配制
　　精密稱取105℃干燥至恒重的氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)品200mg，置于200ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度（即濃度為1mg/mL）
　　2.2 最大吸收波長(zhǎng)的確定
　　取氯化膽堿對(duì)照品溶液加入適量5%雷氏銨鹽甲醇溶液，利用膽堿可與雷氏銨鹽生成紅色復(fù)鹽的原理，進(jìn)行比色測(cè)定，靜置析晶，濾取結(jié)晶，丙酮溶解，UV-2501分光光度計(jì)作全波長(zhǎng)掃描，確定最大吸收峰及波長(zhǎng)。
　　2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
　　分別取氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0ml，分別加水至20.0 mL，再加入5%雷氏銨鹽甲醇夜各5 mL，冰箱放置生成膽堿雷氏鹽結(jié)晶。濾取結(jié)晶，用正丙醇洗三次，丙酮溶出，定容至25.0 mL，在520 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以含量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　2.4 樣品溶液中膽堿的測(cè)定
　　稱取60℃干燥的小樣10g，硝酸加熱回流分解提取，濾液用40%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至9～10，加入過量甲醇，冰箱放置1夜，濾液濃縮加入雷氏銨鹽甲醇溶液，生成粉紅色片狀結(jié)晶，用正丙醇清洗，丙酮溶解結(jié)晶后定容至25 mL容量瓶中，吸取5 mL用丙酮定容至25 mL容量瓶，在520 nm處測(cè)定吸光度，由氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算氯化膽堿的濃度C，并計(jì)算樣品中膽堿的百分含量：膽堿含量（mg/100 g）=C×0.746×稀釋倍數(shù)/稱樣量×100，式中：0.746為膽堿系數(shù)
　　3 結(jié)果及分析
　　3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍
　　根據(jù)2.5的方法測(cè)得各個(gè)濃度下吸光度的值，見表1。以含量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，回歸方程式為：A=0.0098+1.2393C，r=0.9986，說明氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液在0.08～0.72 mg/mL范圍內(nèi)與其吸光度成線性相關(guān)。
　　3.2 精密度實(shí)驗(yàn)
　　精密吸取氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液6.0 mL，按照樣品測(cè)定的條件檢測(cè)5次，結(jié)果其精密度RSD為0.08%，說明精密度較好。
　　3.3 重新性實(shí)驗(yàn)
　　稱取明黨參小樣藥材粉末10 g，精密稱定5份，按樣品溶液制備方法操作，測(cè)定膽堿的含量，經(jīng)計(jì)算得出其RSD為4.5%，說明重現(xiàn)性較好。
　　3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
　　精密吸取氯化膽堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液6.0 mL，按照以上條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表2，由結(jié)果可見在2 h內(nèi)，其RSD為0.3%，說明溶液吸光度值在2 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　3.5 回收率實(shí)驗(yàn)
　　稱取明黨參粉末5份，每份10 g，按照樣品提取方法進(jìn)行處理后用標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法測(cè)定其中的膽堿含量，見表3，由結(jié)果可見，其加樣回收率在98.6%～101.7%，RSD為2.0%，說明回收效率較好，且精確度較高。
　　3.6 不同產(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的相對(duì)含量測(cè)定
　　按照2.6樣品測(cè)定的方法測(cè)定，見表4。
　　3 討 論
　　明黨參藥材中膽堿的相對(duì)含量采用雷氏鹽-紫外分光光度法測(cè)定，經(jīng)過方法學(xué)考察，精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD均在3.0%以內(nèi)，測(cè)得的回收率在98.6%～101.7%之間，均值為100.6%，RSD為2.0%，說明該方法可行。
　　應(yīng)用考察后的方法學(xué)測(cè)定不同產(chǎn)地野生藥材中膽堿的相對(duì)含量，分別為江蘇南京幕府山37.78%，句容天王鎮(zhèn)虎山57.03%，句容茅山41.98%，南京青龍山60.74%，南京紫金山38.20%，南京老山33.99%，安徽滁州32.79%，安徽安慶57.38%，安徽青陽36.16%，浙江杭州38.96%。可看出不同產(chǎn)地野生明黨參藥材中膽堿的含量在32.79%～60.74%之間，其中以江蘇南京青龍山、安徽安慶、江蘇句容天王鎮(zhèn)虎山中膽堿的含量較高。
　　參考文獻(xiàn)
　　[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2005版一部）北京：人民衛(wèi)生出版社&化工工業(yè)出版社，2005：146.
　　[2]李 祥，陳建偉，孫長(zhǎng)華.明黨參中膽堿的分離鑒定和不同采收期的含量測(cè)定[J].中國(guó)野生植物資源，1994，（6）：37-39.
　　[3]毛 娜.脂肪肝的研究近況[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7（2）：122-124.
　　[4]騰宇等.中醫(yī)藥抗脂肪肝的研究進(jìn)展[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)（中醫(yī)臨床版），2005，12（2）：37-41.
　　[5]唐執(zhí)文，周永紅.氯化膽堿含量測(cè)定方法探討[J].中國(guó)飼料，2002，（10）：18-20.
　　本文編輯：劉欣悅

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