[摘要] 目的 優(yōu)選平喘巴布劑藥材的提取工藝。 方法 采用L9（34）正交試驗(yàn)法，對(duì)藥材乙醇提取時(shí)間、乙醇用量、乙醇濃度和提取次數(shù)等影響因素，以芥子堿硫氰酸鹽提取率為考察指標(biāo)，優(yōu)選平喘巴布劑藥材提取工藝。 結(jié)果 最佳提取工藝為用6倍量70%的乙醇回流提取2次，每次2 h。 結(jié)論 優(yōu)選的提取工藝合理，為該復(fù)方的透皮吸收特性的研究奠定良好的基礎(chǔ)。
　　[關(guān)鍵詞] 平喘巴布劑；提取工藝；芥子堿硫氰酸鹽；正交試驗(yàn)
　　[中圖分類號(hào)] TQ461 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）10（b）-0108-04
　　平喘巴布劑源于《張氏醫(yī)通》，是由芥子、延胡索、甘遂、細(xì)辛等幾味藥材組成，具有利氣祛痰散寒逐飲之效，多用于穴位敷貼防治哮喘，屬于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)，療效確切，且在臨床上具有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)[1-2]。在經(jīng)皮給藥制劑中，確保足夠量的藥物透過皮膚進(jìn)入體內(nèi)達(dá)到有效的血藥濃度是關(guān)鍵，方中芥子、延胡索、甘遂、細(xì)辛的主要活性成分均適合于乙醇提取[3-6]，而芥子又為方中君藥，主要含季銨鹽生物堿芥子堿類成分，廣泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子堿，多以硫氰酸鹽形式存在，芥子堿硫氰酸鹽（Sinapine thiocyanate，ST）具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血壓等多種生物活性[3-7]。因此本研究采用正交試驗(yàn)法，以芥子堿硫氰酸鹽的提取率為指標(biāo)，優(yōu)選藥材乙醇提取工藝，確定最佳提取條件，為平喘巴布劑體內(nèi)外透皮吸收特性的研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 藥品與試劑
　　芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111702-201002）；芥子、延胡索、甘遂、細(xì)辛等（廣州致信中藥飲片有限公司）；磷酸二氫鉀、乙醇為分析純；甲醇、乙腈為色譜純；水為怡寶水。
　　1.2 儀器
　　LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；高速中藥粉碎機(jī)（浙江瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海青浦滬西儀器廠）；KQ-500型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；AUW120D精密分析天平（日本島津公司）。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 含量測(cè)定方法的建立
　　2.1.1 色譜條件
　　色譜柱：迪馬Platisil ODS柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），以Phenomenex為保護(hù)柱；流動(dòng)相：乙腈-0.1 mol/L的磷酸二氫鉀=14∶86；檢測(cè)波長(zhǎng)：326 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按芥子堿硫氰酸鹽峰計(jì)算不低于3000。
　　2.1.2 溶液的配制
　　2.1.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品5.67 mg，于100 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相溶解制成56.7 μg/mL的對(duì)照品溶液。
　　2.1.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 精密稱取芥子對(duì)照藥材細(xì)粉1.12 g，置具塞的錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲（功率250 W，頻率20 KHz）提取3次，每次20 min，濾過，濾液減壓回收溶劑至干，殘?jiān)�用流�?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中，定容，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
　　2.1.2.3 供試品溶液的制備 按照處方比例稱取芥子、延胡索、細(xì)辛和甘遂，9份，分別按L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每次提取后趁熱過濾，藥液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至藥材量1∶1的濃縮液，放至室溫后，加水定量至20 mL。然后精密吸取1～9號(hào)提取液各0.2 mL，置10 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得1～9號(hào)正交試驗(yàn)的供試品溶液。
　　2.1.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取除芥子外的其他藥材，與供試品溶液同法制備。
　　2.1.3 方法學(xué)考察
　　2.1.3.1 線性范圍考察 分別精密吸取上述芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液2、6、10、15、20 μL進(jìn)樣，測(cè)定，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y = 3×106X - 29 592，r = 0.9999。結(jié)果表明芥子堿硫氰酸鹽進(jìn)樣量在0.1134～1.1340 μg 范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
　　2.1.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，按芥子堿硫氰酸鹽的峰面積積分值計(jì)算RSD為0.58%，表明該儀器具有良好的精密度。
　　2.1.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取正交試驗(yàn)5號(hào)供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)定芥子堿硫氰酸鹽峰面積，計(jì)算其RSD為1.08%，表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.1.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取正交試驗(yàn)5號(hào)濃縮液，加水定容至20 mL，再精密吸取0.2 mL，5份，按“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備樣品，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，計(jì)算芥子堿硫氰酸鹽含量平均值為0.536%，RSD為1.06%。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。
　　2.1.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取正交試驗(yàn)3號(hào)提取液0.2 mL，6份，分別加入芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液0.1、0.2和0.4 mL，置10 mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，再用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液為加樣回收供試液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率分別為99.35%（RSD = 2.73%），101.66%（RSD =2.13%），99.76%（RSD = 1.86%）。結(jié)果表明，該分析方法的回收率符合要求。
　　2.1.4 樣品分析

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