【摘要】 目的 就建立黃芪藥材中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的方法進行探討。方法 采用HPLC法建立黃芪中黃酮類成分指紋圖譜。結(jié)果 對照品在0.0834-1.5012μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系�；厥章�、平均回收率、RSD都較高。除了樣品2（山西大同）和樣品10（陜西旬邑）外，其它各批的相似度均大于O.94。結(jié)論 本文所選用的方法回收率好、操作簡便，同時專屬性較強，可以對黃芪藥材中黃酮類成分的質(zhì)量更好地控制。
　　【關(guān)鍵詞】 黃芪藥材；黃酮類成分；HPLC指紋圖譜
　　黃芪為補氣中藥，有補氣升陽、益衛(wèi)固表，托毒排膿和益氣利水作用。產(chǎn)于內(nèi)蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地。春秋采挖，除去須根、根頭，曬干。切片，生用或蜜炙用。黃芪性微溫、味甘，含多種微量元素（銅、鋅、硒等）、多種葉酸、氨基酸、多糖、蔗糖、皂甙，可以利尿消腫、補肺固表、補脾益氣，可以有效地調(diào)節(jié)血糖含量、增強心肌收縮力、抗應(yīng)激、抗衰老、抗菌、降壓、利尿，主治肢體麻木、貧血萎黃、氣血不足、臟器下垂、中氣下陷、咳喘短氣、肺氣虛弱、氣虛自汗、脾胃氣虛等??[1]?。為了控制其質(zhì)量，通過研究，并參照有關(guān)文獻??[2]?，用HPLC指紋圖譜法測定黃芪藥材中黃酮類成分，方法簡便可行，準確可靠??[3]?。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器 Agilengt1260高效液相色譜儀（LC2000）、AUW-220D電子分析天平（日本島津）、A4DL型自動純水蒸餾器（廣州恒廣科學(xué)儀器有限公司）、DSQ10260超聲儀（上海亞榮生化儀器廠）、自動進樣器、UV2401-PC紫外分光光度計（日本島津）、RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。
　　1.2 試藥 黃芪藥材均采集于全國各地，按照產(chǎn)地不同分為十批次；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純??[4]?。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 供試品溶液及陰性對照溶液的制備 取6.0g黃芪將其研細，然后進行精密稱定，稱定之后將其置于瓶中，加入40ml含量為70%的乙醇。然后加熱回流3小時，放冷，濾過放于量瓶中（容量為100ml）。再分別對殘渣和容器進行洗滌，洗液并入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取缺黃芩的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對照溶液??[5]?。
　　2.2 線性關(guān)系考察 取在60℃減壓干燥4小時的對照品約10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻。分別進樣1、2、4、6、8、10、12、14、16、18μl，記錄峰面積，以峰面積積分值（Y）對對照品濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程：Y=5827.96835X-42.05934，r=0.9999。結(jié)果表明，對照品在0.0834-1.5012μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系??[6]?。
　　2.3 色譜條件 流動相選用比例為53：47：0.2的甲醇-水-磷酸，流速0.6ml/min；填充劑選用十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測波長為276nm，柱溫控制在35℃??[6]?。
　　2.4 精密度實驗 取黃芪藥材樣品粉末（50目）約1.5g，進行供試品的制備，采用上述色譜條件，進樣20μL，連續(xù)進樣6針，并以5號峰作為參照峰，結(jié)果各峰相對保留時間和相對峰面積的RSD（n=6）均小于2%。
　　2.5 穩(wěn)定性試驗 在室溫條件下，取供試品溶液分別在0，2，4，6，8，10，12h各進樣10μl，（放置0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時，然后各進樣10μl），得出試驗結(jié)果：n=7，RSD為：0.9%，平均峰面積為：2714238，這些數(shù)據(jù)充分表明在12h內(nèi)，樣品的穩(wěn)定性良好。
　　2.6 重復(fù)性實驗 取同一批黃芪藥材樣品粉末（50目）約1.5g，平行稱定5份進行供試品的制備，采用上述的色譜條件，進樣20μL，結(jié)果各色譜峰相對保留時間和相對保留峰面積的平均值的RSD均小于3%。
　　2.7 回收率試驗 回收率試驗采用加樣回收法，取100g黃芪藥材，然后對其進行認真地研細，研細之后稱取樣品18g，分為6份，每份3g。然后加入5ml含量為0.2055mg.ml??-1?的對照品儲備液，按照（3）的方法進行提取，制成供試品溶液。然后計算回收率、平均回收率等，見表1，可見回收率、平均回收率、RSD都較高。
　　2.8 指紋圖譜中峰面積相似度計算 實驗結(jié)果表明，10批不同產(chǎn)地黃芪藥材的相似度在0.826-0.990之間，除了樣品2（山西大同）和樣品10（陜西旬邑）外，其它各批的相似度均大于0.94，見表2。3 討 論
　　3.1 本實驗建立黃芪中活性成分黃酮類成分HPLC指紋圖譜，為了提高黃酮類成分的溶解度和純度，實驗對其提取工藝進行了反復(fù)的摸索與優(yōu)化??[7]?。
　　3.2 本文所選用的方法回收率好、操作簡便，同時專屬性較強，可以對黃芪藥材中黃酮類成分的質(zhì)量更好地控制。
　　參考文獻
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