摘要
　　以蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌、棉花枯萎病菌、柑橘炭疽病菌與白菜黑斑病菌為供試菌，采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定25種中藥材甲醇粗提物的抑菌活性。結(jié)果表明，在濃度為5.0 mg/mL時(shí)，大部分中藥材的甲醇粗提物對(duì)至少一種植物病原真菌都表現(xiàn)出不同程度的抑制活性，其中知母、青蒿、細(xì)辛與白鮮皮對(duì)3種供試植物病原菌的抑制率大于75%，而茜草與姜黃對(duì)4種供試植物病原菌的抑制率均在80%以上，具有廣泛的抑菌譜。進(jìn)一步采用系統(tǒng)溶劑法得到的茜草不同溶劑萃取物中，水飽和正丁醇相抑菌活性明顯優(yōu)于石油醚及乙酸乙酯相，表明茜草抑菌活性成分主要為中等及大極性化合物。
　　關(guān)鍵詞
　　中藥材；茜草；甲醇提取物；植物病原真菌；抑制活性
　　中圖分類號(hào)：
　　S 482.292
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　DOI：10.3969/j.issn.05291542.2015.04.020
　　我國(guó)藥用植物資源十分豐富，僅中藥典籍《本草綱目》中收錄就超過1 000種，其中相當(dāng)一部分具有抑菌或殺蟲活性。因此，借鑒傳統(tǒng)藥用植物醫(yī)用研究成果，研究其對(duì)植物病害的防治作用，已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外開發(fā)植物源農(nóng)藥的重要途徑[1]。藥用植物是提取結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特的天然產(chǎn)物的重要資源，可從中發(fā)掘具有較好農(nóng)用抑菌活性的先導(dǎo)化合物，進(jìn)而開發(fā)植物源農(nóng)藥[2]。近年來，西北農(nóng)林科技大學(xué)無公害農(nóng)藥研究服務(wù)中心從苦豆子[3]、大花金挖耳[4]、孜然[5]等藥用植物中，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了天名精內(nèi)酯酮和天名精內(nèi)酯醇[6]、枯茗醛和枯茗酸[7]等抑菌活性成分，有望進(jìn)一步開發(fā)為農(nóng)用殺菌劑。本論文選取了25種記載有醫(yī)用抑菌活性的中藥材，對(duì)其抑制植物病原真菌活性進(jìn)行了篩選，旨在為發(fā)掘抑菌活性先導(dǎo)化合物奠定基礎(chǔ)。
　　1.2供試植物病原真菌
　　蘋果腐爛病菌（Valsa mali）、蘋果輪紋病菌（Botryosphaeria dothidea）、棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum）、柑橘炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）與白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）由山東省農(nóng)業(yè)仿生工程應(yīng)用技術(shù)研究中心提供，并經(jīng)青島農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與植物保護(hù)學(xué)院金靜教授鑒定。供試菌株接種在PDA斜面上，4 ℃冰箱保存。使用前，接種至PDA平板表面，25 ℃恒溫培養(yǎng)3～4 d備用。
　　1.3中藥材甲醇粗提物與茜草不同溶劑萃取物的制備
　　分別稱取各中藥材粉末50 g，用300 mL甲醇浸泡1 h后，超聲波振蕩提取30 min，減壓抽濾，濾渣再采用上述方法處理，重復(fù)3次。合并濾液，減壓濃縮，冷凍干燥得到中藥材甲醇粗提物，密封后置于4 ℃冰箱保存。
　　對(duì)初篩具有較好抑菌活性的茜草甲醇粗提物，采用系統(tǒng)溶劑法制備不同極性溶劑的萃取物，進(jìn)一步考察其抑菌活性。將茜草的甲醇粗提物以一定量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯及水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，所得萃取液及剩余的水相經(jīng)濃縮干燥，得到茜草不同極性溶劑的萃取物，密封后置于4 ℃冰箱保存。
　　1.4抑菌活性的離體測(cè)定
　　采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定供試中藥材甲醇粗提物及茜草不同溶劑萃取物的抑菌活性。稱取適量甲醇粗提物，以50%乙醇混懸，加入到融化的無菌PDA培養(yǎng)基（約50 ℃）中混勻，得到濃度為5.0 mg/mL的含藥培養(yǎng)基平板。培養(yǎng)基中乙醇的含量小于3%，以含等量乙醇的PDA培養(yǎng)基作為對(duì)照，每處理3次重復(fù)。
　　稱取適量的茜草不同溶劑萃取物，以50%乙醇混懸，采用上述方法配制成1.0 mg/mL的含藥培養(yǎng)基平板。培養(yǎng)基中乙醇的含量小于3%，設(shè)置含等量乙醇的溶劑對(duì)照，每處理3次重復(fù)。
　　用打孔器打取生長(zhǎng)一致的植物病原真菌菌餅（6 mm），接種于含藥PDA平板以及對(duì)照PDA平板的中央（菌餅長(zhǎng)滿菌絲一面向下），25 ℃恒溫培養(yǎng)，待對(duì)照平板長(zhǎng)滿菌絲時(shí)，采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，并按以下公式計(jì)算抑制率：
　　純生長(zhǎng)量（mm）=菌落平均直徑-菌餅直徑；
　　抑制率（%）=
　　對(duì)照菌落純生長(zhǎng)量-處理菌落純生長(zhǎng)量對(duì)照菌落純生長(zhǎng)量×100。
　　1.5茜草與姜黃甲醇粗提物對(duì)植物病原真菌的毒力測(cè)定
　　以茜草與姜黃甲醇粗提物抑菌率較高的植物病原真菌為供試菌種，按照1.4所述方法，依次配制得到濃度為2.5、1.0、0.75、0.5與0.25 mg/mL的含藥培養(yǎng)基平板，以加入等量溶劑的平板為對(duì)照，每處理3次重復(fù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0對(duì)藥劑濃度的對(duì)數(shù)（x）與校正抑制率的幾率值（y）進(jìn)行回歸分析，得到毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)及抑制中濃度（EC50）。
　　2結(jié)果與分析
　　2.1中藥材甲醇粗提物的抑菌活性
　　供試中藥材的甲醇粗提物濃度為5.0 mg/mL時(shí)，25種中藥材甲醇粗提物中有14種分別對(duì)至少1種植物病原真菌的抑制率大于75%，占供試樣品的56%，分布于13個(gè)科；而知母、姜黃、青蒿、細(xì)辛、白鮮皮與茜草對(duì)至少3種供試植物病原菌的抑制率大于75%，具有廣泛的抑菌譜。其中，茜草甲醇粗提物對(duì)蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌與柑橘炭疽病菌的抑制率均大于90%，對(duì)棉花枯萎病菌也大于85%，值得進(jìn)一步深入研究；而姜黃甲醇粗提物對(duì)除蘋果輪紋病菌外的4種供試植物病原菌也表現(xiàn)出較好的抑制活性，抑制率均大于80%（表2）。
　　中藥材甲醇粗提物抑菌活性的選擇性明顯。近40%的中藥材甲醇粗提物分別對(duì)蘋果腐爛病菌、蘋果輪紋病菌與柑橘炭疽病菌有較好抑制活性，抑制率均大于75%；其中車前草甲醇粗提物對(duì)蘋果腐爛病菌與蘋果輪紋病菌的抑制率均大于95%，但對(duì)其余供試植物病原菌沒有抑制活性，具有明顯的選擇性。而對(duì)白菜黑斑病菌有較好抑制活性的僅有姜黃與五倍子甲醇粗提物，抑制率分別為80.6%與86.0%。此外，僅有姜黃、茜草與細(xì)辛甲醇粗提物對(duì)棉花枯萎病菌的抑制率大于75%，其余均小于60%。

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