[摘要] 目的 建立了干蟾皮中華蟾酥毒基的含量測定方法。 方法 色譜法：采用Waters Xbridge C18反相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.5%磷酸二氫鈉溶液∶乙腈（52∶48）加磷酸調(diào)pH 3.2；檢測波長為294 nm；流速：1 mL/min；柱溫為室溫。 結(jié)果 華蟾酥毒基在進樣量2.5～15.0 μg（r = 0.9999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程y = -4×107x-10 196（r = 0.9999）；溶液精密度、重復性均良好；在12 h內(nèi)測定，其穩(wěn)定性最佳；溶液加樣回收實驗考察得平均回收率為97.4%，RSD = 2.8%。5批干蟾皮藥材的含量分別為0.012、0.009、0.013、0.011、0.007 mg/g，平均含量為0.010 mg/g。 結(jié)論 本方法建立的色譜條件科學、快速、穩(wěn)定，可作為干蟾皮藥材內(nèi)在質(zhì)量的控制方法。
　　[關(guān)鍵詞] 干蟾皮；華蟾酥毒基；高效液相色譜法；含量測定
　　[中圖分類號] R284.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）06（b）-0116-03
　　干蟾皮是兩棲綱蟾蜍科動物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍去除內(nèi)臟的干燥體[1]，其全身均可供藥用。干蟾皮是一種使用廣泛的藥材，性寒味苦，具有破結(jié)、消疳積、行水、解毒、殺蟲、定痛等功效[2-5]。用于治療小兒疳積、慢性氣管炎臃腫疔毒等癥病�，F(xiàn)代藥理實驗表明干蟾皮對腫瘤亦有抑制作用，我國多用來治療原發(fā)性肝、肺癌及腸癌等，其制劑如華蟾素注射液在臨床上也有廣泛應(yīng)用，主要治療中晚期消化道癌、肝炎等，效果明顯。干蟾皮的主要抗腫瘤活性成分為蟾酥毒類成分，如蟾毒靈、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基等[6]。近年來有關(guān)蟾皮有效成分的提取、分離及鑒定研究較多[7-9]。蟾皮的主要提取方法有水煎煮法、超聲法、回流提取法等。本研究采用DM130樹脂動態(tài)處理干蟾皮提取液的方法進行了研究，對干蟾皮中華蟾酥毒基進行了含量測定，不僅能高效提取指標成分，且減少了雜質(zhì)的溶出，提高華蟾酥毒基的系統(tǒng)適應(yīng)性，控制了干蟾皮的內(nèi)在質(zhì)量。
　　1 儀器與試藥
　　1.1 儀器
　　高效液相色譜儀：SSI-Ⅲ型雙元液相泵、Molde紫外檢測器（美國SSI）；萬分之一電子分析天平（德國塞多利斯）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海豫康）；KQ-250超聲波清洗器（上海昆山）；DM130大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，長12 cm）。
　　1.2 試劑
　　乙腈（色譜純，美國TEDIA）；水為純凈水， 其余試劑均為市售分析純。
　　1.3藥品
　　對照品：華蟾酥毒基（中國生物制品檢定所，批號：110803-200504）；樣品：干蟾皮，來源于浙江省富陽市中醫(yī)醫(yī)院中藥房。
　　2 方法
　　2.1 色譜條件的選擇
　　參照《中國藥典》2010年版一部蟾酥項下測定方法[2]。色譜柱：Waters XbridgeC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.5%磷酸二氫鈉溶液-乙腈（52∶48）加磷酸調(diào)pH 3.2； 檢測波長為294 nm；流速：1 mL/min；柱溫為室溫。華蟾酥毒基色譜見圖1，結(jié)果示華蟾酥毒基峰的保留時間在15.330 min。
　　2.2 標準品溶液的配制
　　精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥24 h的華蟾酥毒基對照品5 mg，至于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得濃度為0.1 mg/mL的華蟾酥毒基溶液。
　　2.3 供試品溶液的制備
　　稱取干蟾皮粗粉5 g，加石油醚（每次30 mL）超聲脫脂，每次30 min，共脫脂2次，殘渣揮去石油醚，加甲醇50 mL超聲提取30 min，提取3次，過濾，合并濾液，濾液蒸干，殘渣加10 mL水微熱溶解，過DM130大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，長12 cm），用40 mL水洗，棄去水液，再以50 mL 50%乙醇洗，棄去50%乙醇洗液，繼以70%乙醇洗，收集70%乙醇液，蒸干，殘渣分別加甲醇溶解轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得供試品溶液。
　　2.4 線性關(guān)系考察
　　精密吸取華蟾酥毒基對照品溶液2.5、5.0、7.5、10、12.5、15 mL，于100 mL量瓶中，加甲醇至刻度。分別吸取10 μL注入高效液相，測定峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得方程y = -4×107x -10 196（r = 0.9999），表明華蟾酥毒基在進樣量2.5～15.0 μg（r = 0.9999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。華蟾酥毒基標準曲線見圖2。
　　2.5 精密度試驗考察
　　精密吸取同一濃度對照品溶液注入高效液相色譜儀，重復5次，測定峰面積，結(jié)果顯示蟾酥毒基峰5次峰面積分別為410 395、415 812、407 237、416 503、412 962 mAU，RSD為0.93%。表明所用儀器具有良好的精密度。
　　2.6 重復性試驗考察
　　取同一批號干蟾皮藥材粗粉5份，分別按供試品制備方法制備供試品溶液，于上述色譜條件測定，計算華蟾酥毒基峰面積。結(jié)果顯示其5次峰面積分別為446 245.5、432 267.5、444 791.5、412 962.0、450 377.0 mAU，RSD為3.54%，表明該方法具有良好的重復性。
　　2.7 穩(wěn)定性實驗考察
　　精密吸取同一供試品溶液，按色譜條件于0、3、5、7、12 h測定，結(jié)果華蟾酥毒基峰面積分別為445 225.0、431 234.5、440 294.5、433 962.0、426 311.0 mAU，RSD為3.12%，表明華蟾酥毒基穩(wěn)定性良好，在12 h內(nèi)測定最佳。

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