摘要：目的 建立通關(guān)藤藥材及消癌平片中通關(guān)藤苷A的高效液相色譜含量測(cè)定方法。方法 色譜柱：Sinochrom ODS-BP分析柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（41∶59）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。結(jié)果 通關(guān)藤苷A在0.996～19.92 ?g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 95，平均加樣回收率為96.6%，RSD=2.19%（n=6）。結(jié)論 本方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性和重復(fù)性好，可用于通關(guān)藤藥材及消癌平片的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。
　　關(guān)鍵詞：通關(guān)藤；消癌平片；通關(guān)藤苷A；高效液相色譜法
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.021
　　中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2013）03-0055-03
　　通關(guān)藤，又名烏骨藤、通光散、通光藤等，是蘿藦科牛奶菜屬植物通關(guān)藤M(fèi)arsdenia tenacissima（Roxb）.Wight et Arn的干燥莖、藤[1]，主要分布于貴州、云南、廣西等地。通關(guān)藤含有多種化學(xué)成分，包括C21甾體苷類、三萜皂苷類、多糖類、醇類、揮發(fā)油、生物堿、有機(jī)酸類等化學(xué)成分。消癌平片是由通關(guān)藤制成的單方制劑，具有清熱解毒、止咳平喘、散結(jié)止痛、抗癌之功效[1]。通關(guān)藤提取物在體外對(duì)胃癌、肝癌、食管癌等癌細(xì)胞具有抑制作用[2-4]。已有研究表明，C21甾體皂苷類為通關(guān)藤中主要抗腫瘤成分[5]。然而，目前文獻(xiàn)報(bào)道的消癌平制劑多以綠原酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究擬建立通關(guān)藤苷A的高效液相色譜（HPLC）含量測(cè)定方法，為規(guī)范通關(guān)藤藥材及其制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。
　　1 儀器與試藥
　　Agilent1100高效液相色譜儀，包括Agilent G1321A四元泵、G1322A真空在線脫氣機(jī)、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315 DAD二極管陣列檢測(cè)器、Agilent安捷倫化學(xué)工作站；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP211D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。
　　通關(guān)藤苷A對(duì)照品（純度≥98.3%），山西省中醫(yī)藥研究院方劑研究所自制。5批消癌平片（批號(hào)091220、091221、091222、091224、091227），江蘇天禾制藥有限公司生產(chǎn)。乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。
　　通關(guān)藤藥材經(jīng)山西省中醫(yī)藥研究院李先榮主任藥師鑒定。采收時(shí)間及產(chǎn)地見表1。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 供試品溶液的制備
　　取通關(guān)藤藥材過(guò)60目篩粉末1 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加入40 mL甲醇，超聲30 min（功率150 W，頻率40 kHz），濾過(guò)，濾液濃縮，定容于10 mL量瓶中，即得通關(guān)藤藥材供試品溶液。
　　稱取消癌平片20片，去包衣，精密稱定，碾細(xì)，取2.4 g粉末，加120 mL蒸餾水于燒杯中溶解。濾過(guò)，濾液用氯仿萃取3次，每次30 mL，收集氯仿層，合并萃取液，水浴蒸干，甲醇定容至5 mL，即得消癌平片供試品溶液。
　　2.2 對(duì)照品溶液的制備
　　稱取通關(guān)藤苷A 10 mg，精密稱定，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，即得0.996 mg/mL對(duì)照品溶液。
　　2.3 色譜條件
　　色譜柱：Sinochrom ODS-BP分析柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（41∶59）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；進(jìn)樣量：10 ?L；柱溫：室溫。理論塔板數(shù)按通關(guān)藤苷A峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。通關(guān)藤苷A峰型良好，色譜圖見圖1。
　　2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
　　分別精密吸取通關(guān)藤苷A對(duì)照品溶液1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 ?L，注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，以通關(guān)藤苷A進(jìn)樣量（?g）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=441 389X-62.216，r=0.999 95。結(jié)果表明，通關(guān)藤苷A進(jìn)樣量在0.996～19.92 ?g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
　　2.5 精密度試驗(yàn)
　　精密吸取上述對(duì)照品溶液10 ?L，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD=0.13%（n=6），表明儀器精密度良好。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　精密吸取同一供試品溶液10 ?L，注入高效液相色譜儀，分別于0、2、4、8、16、24 h測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD=1.16% （n=6），表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
　　取同一產(chǎn)地通關(guān)藤藥材1 g，6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 ?L，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果通關(guān)藤苷A平均含量為0.142 55 mg/g， RSD=2.34%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。
　　2.8 加樣回收率試驗(yàn)
　　取0.5 g通關(guān)藤藥材（SS8）3份，分別加入5 mL通關(guān)藤苷A和甲醇35 mL，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 ?L，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算回收率分別為98.2%、97.4%、94.2%，平均回收率為96.6%，RSD=2.19%（n=6）。
　　2.9 樣品含量測(cè)定
　　取“2.1”項(xiàng)下配制的不同產(chǎn)地通關(guān)藤供試品溶液及消癌平片供試品溶液分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)量，從而算出藥材及消癌平片中所含對(duì)照品通關(guān)藤苷A的含量，結(jié)果見表2、表3。
　　3 討論
　　通過(guò)對(duì)通關(guān)藤苷A對(duì)照品和不同產(chǎn)地通關(guān)藤藥材掃描，最大吸收波長(zhǎng)均在223 nm處，所以檢測(cè)波長(zhǎng)采用223 nm。本試驗(yàn)所采用的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性良好，可用于通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定。
　　不同產(chǎn)地通關(guān)藤藥材中通關(guān)藤苷A含量差異大。明顯可分為3個(gè)范圍：藥材SS1、SS8、SS9接近，在0.9%左右；藥材SS3、SS5、SS7、SS6相差不大，在0.5%～0.6%之間；藥材SS2、SS4中含量相對(duì)較低。
　　消癌平片為通關(guān)藤藥材的水提物制劑，前期用D101及ZTC樹脂處理過(guò)該片劑，但雜質(zhì)峰明顯，且操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，后改用液-液萃取法，得到的溶液中雜質(zhì)含量低，操作簡(jiǎn)便省時(shí)，不影響通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定，可用于消癌平片中通關(guān)藤苷A的含量測(cè)定。
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　�。ㄊ崭迦掌冢�2012-07-08，編輯：陳靜）

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