摘要：通過高效液相色譜法（HPLC）測定不同產(chǎn)地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量，以期為黃芪藥材質(zhì)量評定提供依據(jù)。采用Waters Symmetry C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm ），流動相為乙腈-水（81 ∶19），流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測波長260 nm。結(jié)果表明：毛蕊異黃酮葡萄糖苷的濃度在0.145 6～0.698 7 mg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 7，平均加樣回收率為100.35%，RSD為1.98%，所建方法快速、簡便、重現(xiàn)性好。4個省份16個產(chǎn)地藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異較大，其中內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市所產(chǎn)黃芪中其含量最高。從各地平均值看，內(nèi)蒙古自治區(qū)>山西省>甘肅省>黑龍江省，且內(nèi)蒙古自治區(qū)與其他3個省份藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量差異顯著。省內(nèi)之間的差異顯著性結(jié)果表明，內(nèi)蒙自治區(qū)和山西省產(chǎn)地之間差異較大，甘肅省和黑龍江省產(chǎn)地之間差異較小。
　　關(guān)鍵詞：黃芪；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；HPLC
　　中圖分類號： S567.01
　　文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A
　　文章編號：1002-1302（2016）04-0226-03
　　黃芪為著名滋補(bǔ)中藥，是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge.]的干燥根。現(xiàn)代藥理研究表明：黃芪具有斂瘡生肌、延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫等功能[1]。諸多研究證明，黃酮類作為黃芪中的主要成分之一，其抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等多方面的藥理作用非常顯著[2-6]。毛蕊異黃酮葡萄糖苷作為黃芪藥材中黃酮類的主要成分，已被2010版《中國藥典》作為黃芪藥材的指標(biāo)性成分[1]。
　　黃芪分布于華北、東北及西北地區(qū)。目前市場上的黃芪藥材產(chǎn)地較廣，品質(zhì)差異較大[7-8]。本研究通過對黃芪4個主產(chǎn)省份山西省、內(nèi)蒙自治區(qū)、黑龍江省、甘肅省16個不同產(chǎn)地藥材中的毛蕊異黃酮葡萄糖苷進(jìn)行測定，并運用SSR法比較不同產(chǎn)地黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的差異大小，研究結(jié)果可為黃芪藥材的品質(zhì)評價提供基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　1 儀器、材料和試劑
　　1.1 儀器
　　Waters 2695高效液相色譜儀、2998 PDA檢測器、RE-52AA 系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器、SHZ-DIII循環(huán)水式多用真空泵、FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)、FA1004電子天平、DK-S24電熱恒溫水浴鍋、GF-101型電熱鼓風(fēng)干燥箱。
　　1.2 材料
　　黃芪藥材分別購于山西省、內(nèi)蒙自治區(qū)、黑龍江省、甘肅省等當(dāng)?shù)厮幉氖袌觯��?個省16個不同產(chǎn)地的黃芪，經(jīng)運城學(xué)院滕紅梅教授認(rèn)定均為黃芪藥材。將藥材置于40 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行干燥，研成粉末過60目篩保存以備用。
　　1.3 試劑
　　毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：20141109）；水為二次重蒸水，甲醇和乙腈為色譜純。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷測定方法的建立
　　2.1.1 色譜條件 Waters公司Symmetry C18 色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相水-乙腈（81 ∶19）；柱溫，30 ℃；流速，1.0 mL/min；檢測波長，260 nm；進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見圖1。
　　2.1.2 對照品溶液的制備 精確稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品6.950 mg置10 mL容量瓶中。加甲醇溶解、搖勻，即得。
　　2.1.3 供試品溶液的制備 將精確稱取的2 g黃芪粉末置于具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，于80 ℃水浴鍋中加熱回流4 h，待放涼后再搖勻過濾，濾渣用10 mL甲醇洗滌2～3次，之后將原液與洗滌液合并，減壓回收溶劑后將殘渣加甲醇溶解，再轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻后用微孔濾膜過濾，即得到供試品溶液。
　　2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 吸取毛蕊異黃酮苷對照品溶液 1 000 μL，加入濾過的甲醇2 000 μL，再用微孔濾膜濾過，置于樣品瓶中。按“2.1.1”節(jié)的色譜條件分別進(jìn)樣2、4、6、8、10 μL，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品濃度與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為y=3.80×107 x+1.06×106，r=0.999 7，線性范圍0.145 6～0.698 7 mg/mL。
　　2.1.5 精密度試驗 精確吸取山西省渾源市同一供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，測得毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為0.46%。
　　2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取山西省渾源市同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24 h檢測，顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.20%。
　　2.1.7 重現(xiàn)性試驗 準(zhǔn)確稱取產(chǎn)自山西省渾源市的藥材粉末平行樣品5份，按“2.1.3”節(jié)的制備方法操作，顯示毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為1.67%，平均含量為 0.234 mg/g，表明本法重現(xiàn)性良好。
　　2.1.8 回收率試驗 稱取含量已知的同一批樣品5份，每份約0.5 g，依次加入濃度為0.133 mg/mL的毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液4 mL。按“2.1.3”節(jié)方法配制樣品溶液，并于“2.1.1”節(jié)色譜條件下進(jìn)樣，根據(jù)測量結(jié)果計算出各對照品的平均加樣回收率。計算所得回收率為100.35%，RSD為 1.98%。
　　2.1.9 樣品含量測定 精確量取樣品溶液按照“2.1.1”節(jié)的色譜條件測定其峰面積，根據(jù)“2.1.2”節(jié)得出的回歸方程計算不同產(chǎn)地黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量。

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