[摘要] 目的：建立氣滯胃痛顆粒抗炎活性的譜效關(guān)系分析方法，為中藥復(fù)方的質(zhì)量控制和藥效評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。方法：在建立氣滯胃痛顆粒全時(shí)段多波長(zhǎng)融合指紋圖譜分析方法的基礎(chǔ)上，采用拉丁超立方法對(duì)氣滯胃痛顆粒中6味藥材隨機(jī)采樣成不同比例組，測(cè)定各組對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放TNF-α，IL-6，NO的抑制率，將藥效信息與各組HPLC指紋圖譜化學(xué)信息用灰色關(guān)聯(lián)度分析得出各色譜峰對(duì)抗炎活性的影響程度，再用BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行擬合，建立譜效關(guān)系。結(jié)果：有25個(gè)色譜峰與抗炎活性密切相關(guān)，采用3層BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，以這25個(gè)色譜峰量化峰面積作為輸入項(xiàng)，建立了氣滯胃痛顆�？寡姿幮У纳窠�(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型。結(jié)論：該模型預(yù)測(cè)誤差小于7%，能較好的擬合復(fù)方中復(fù)雜的非線性關(guān)系，可以應(yīng)用于復(fù)方中藥譜效關(guān)系研究。通過(guò)譜效研究建立了評(píng)價(jià)氣滯胃痛顆�？寡谆钚缘男路椒ǎ�是中藥復(fù)方質(zhì)量控制和尋找藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效途徑，具有一定實(shí)際意義。
　　[關(guān)鍵詞]氣滯胃痛顆粒；抗炎；譜效關(guān)系；神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)；灰色關(guān)聯(lián)度法
　　[稿件編號(hào)] 20121025006
　　[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81241111）；國(guó)家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2010ZX09401-304-201）
　　[通信作者] *孟憲生，Tel：（0411）87406496，E-mail： mxsvvv@126.com
　　[作者簡(jiǎn)介] 許雯雯，碩士研究生，Tel：（0411）87406496，E-mail：xww159@sina.com
　　氣滯胃痛顆粒為《中國(guó)藥典》收載的非處方中成藥，由柴胡、延胡索（炙）、枳殼、香附（炙）、白芍、炙甘草6味藥材組成，有舒肝理氣，和胃止痛之效^[1]，臨床上可用于治療肝郁氣滯，胸痞脹滿，胃脘疼痛等癥，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗?jié)�瘍、促胃�?dòng)力3個(gè)主要作用^[2-3]。《中國(guó)藥典》2010年版一部主要采用高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷含量。中藥復(fù)方化學(xué)指紋圖譜對(duì)化學(xué)成分定性定量起到質(zhì)量控制的作用，但不能全面反映中藥復(fù)方的真實(shí)藥效。本實(shí)驗(yàn)將氣滯胃痛顆粒中6味道地藥材通過(guò)拉丁超立方法^[4]隨機(jī)采樣成不同比例組后提取，進(jìn)行體外抗炎活性的實(shí)驗(yàn)研究，采用綜合評(píng)分法^[5]對(duì)3個(gè)考察指標(biāo)做了進(jìn)一步數(shù)學(xué)處理，使之更加科學(xué)化，將藥效學(xué)信息與各組HPLC指紋圖譜的化學(xué)信息用灰色關(guān)聯(lián)度分析^[6]軟件進(jìn)行相關(guān)性分析，得出與抗炎活性密切相關(guān)的化學(xué)成分，并運(yùn)用BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)建立了抗炎活性的預(yù)測(cè)模型，以便更好地評(píng)價(jià)氣滯胃痛顆�？寡椎恼鎸�(shí)藥效。
　　1 材料
　　1.1 儀器與設(shè)備 Agilent-1100高效液相色譜儀（Agilent 1100泵、Agilent 1100光電二級(jí)陣列檢測(cè)器、Agilent 1100色譜工作站，美國(guó)安捷倫科技公司）；Sartorius CP225D電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；NUAIRETM US AUTOFLOW型CO₂培養(yǎng)箱（德國(guó)NUAIRE公司）；AE31型倒置相差顯微鏡（德國(guó)Motic公司）；SUNRISE酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司）；血球計(jì)數(shù)板（上海求精生化儀器廠）；96孔無(wú)菌培養(yǎng)板（美國(guó)Costar公司）。
　　1.2 藥材與試劑 柴胡、延胡索、白芍、甘草、香附、枳殼藥材均由遼寧本溪三藥有限公司提供，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定，分別為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根、罌粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖、毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖、莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖、蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)；氣滯胃痛顆粒（遼寧本溪三藥有限公司，批號(hào)20111123）；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品（批號(hào)018-8905，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，TEDIA公司）；甲酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）； DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)GIBCO公司）；胎牛血清（美國(guó)GIBCO公司）；小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒、小鼠一氧化氮（NO）試劑盒、小鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）試劑盒（上海源葉生物科技有限公司）。
　　1.3 細(xì)胞株 小鼠單核巨噬細(xì)胞株RAW264.7由中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心提供。
　　1.4 動(dòng)物 健康SD大鼠，體重（200±20） g，雌性，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（遼）2011-0002。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 供試樣品的制備 拉丁超立方采樣（LHS）屬于分層采樣，是一種有效地用采樣值反映隨機(jī)變量的整體分布方法，其目的是要保證所有的采樣區(qū)域都能夠被采樣點(diǎn)覆蓋^[7]。使用Isight軟件對(duì)各藥材量進(jìn)行拉丁超立方采樣，柴胡、甘草、延胡索、枳殼、香附均按0～10 g，白芍按0～15 g抽樣，進(jìn)行20次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。
　　表1 拉丁超立方隨機(jī)抽樣結(jié)果
　　Table 1 Results of LHSg
　　將20組藥材分別混勻，置圓底燒瓶中，20倍量水回流提取2 h，搖勻，濾過(guò)，揮干，均定容到250 mL量瓶中，取藥液用95%乙醇沉至醇濃度為90%，靜置24 h，濾過(guò)，揮干，均定容到250 mL量瓶中，取2 mL供試品溶液，加入對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品200 μL（0.229 9 g·L^-1）作為內(nèi)標(biāo)液，再用直徑為0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾除菌，置于4 ℃保存待用。其余供試品溶液置水浴鍋中揮干后計(jì)算出膏率，備用，留做藥效實(shí)驗(yàn)。

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