[摘要]目的：建立蟾蜍類藥材中吲哚生物堿和蟾毒配基類成分的HPLC含量測定法，并對蟾酥、蟾皮、蟾衣中2類成分進行分析。方法：吲哚生物堿類，Nucleosil C18柱，乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液（6∶94，磷酸調pH 3.2）為流動相，流速0.8 mL·min^-1，檢測波長275 nm，柱溫30 ℃；蟾毒配基類，Alltima C18柱，乙腈（A）-0.3%乙酸溶液（B）為流動相，梯度洗脫（0～15 min，28%～54%A；15～35 min，54%A），流速0.6 mL·min^-1，檢測波長296 nm，柱溫30 ℃。結果：五羥色胺、N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀依次在0.079 6～0.796，0.097 2～1.945，0.074 4～0.744，0.103～2.05，0.067 2～0.672 μg線性關系良好；五羥色胺和N-甲基五羥色胺的平均加樣回收率依次為98.6 %和91.3 %；日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈、華蟾酥毒基、脂蟾毒配基依次在0.004 83～0.614，0.007 9～1.006，0.007 95～1.016，0.009 7～1.24，0.009 6～1.22 μg線性關系良好；平均加樣回收率依次為101.6%，102.5%，101.0%，99.1%，98.9%。結論：蟾酥中吲哚生物堿和蟾毒配基類成分含量均較高，蟾皮中含量次之，蟾衣中含量最低甚至檢測不到。
　　[關鍵詞]蟾酥；蟾皮；蟾衣；吲哚生物堿；蟾毒配基；HPLC
　　蟾酥、蟾皮（干蟾）和蟾衣分別來源于蟾蜍科動物中華大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider皮膚腺和耳后腺干燥分泌物、除去內臟的干燥表皮（全體）和自然褪下的角質衣膜。蟾蜍類中藥材中化學成分主要包括吲哚生物堿和蟾毒配基2類，目前已從中分離得到蟾毒配基類化合物103個，吲哚生物堿類12個[1]；關于該類藥材的質量分析多集中于蟾毒配基類成分，關于吲哚生物堿類成分的含量測定較少[2-3]。本實驗建立了蟾蜍類藥材中5種吲哚生物堿（五羥色胺、N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀）和5種蟾毒配基類化合物（日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈、華蟾酥毒基、酯蟾毒配基）的HPLC測定法，比較了蟾酥、蟾皮、蟾衣中兩類成分的含量差異，為蟾蜍類藥材的全面質量控制提供了參考依據(jù)。
　　1材料
　　Shimadzu LC-20A高效液相色譜儀，包括LC-20AT溶液傳輸單元，SIL-20A自動進樣器，SPD-M20A二極管陣列檢測器，LC Solution色譜工作站（日本島津公司），色譜甲醇和乙腈（Fisher公司），其他試劑為分析純，娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。
　　五羥色胺鹽酸鹽[阿法埃莎（天津）化學有限公司，純度為99%]，N-甲基五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺、日蟾毒它靈、蟾毒它靈、蟾毒靈為鮮蟾酥中分離制備，蟾蜍噻嚀為干蟾皮中分離得到，面積歸一化法測定純度（N，N-二甲基五羥色胺、蟾蜍噻嚀、蟾毒它靈和蟾毒靈均大于98%，N-甲基五羥色胺96.5%，N，N，N-三甲基五羥色胺96.3%，日蟾毒它靈92.9%），華蟾酥毒基（批號110803-200605）和酯蟾毒配基（批號110718-200507）購于中國食品藥品檢定研究院。
　　蟾酥、蟾皮、蟾衣樣品分別收集或采集于山東菏澤、江蘇南通等主產區(qū)。
　　2方法與結果
　　2.1吲哚生物堿類成分
　　2.1.1色譜條件Nucleosil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，Macherey-Nagel），Brava C18-BDS保護柱（4.6 mm×7.5 mm，5 μm，GRACE），流動相為乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液（6∶94，磷酸調pH 3.2），流速0.8 mL·min^-1，檢測波長275 nm，柱溫30 ℃。對照品和樣品的HPLC圖見圖1。
　　2.1.2對照品溶液的制備精密稱取五羥色胺鹽酸鹽和N，N-二甲基五羥色胺對照品各適量，甲醇溶解，得質量濃度為0.398 g·L^-1的五羥色胺鹽酸鹽和0.595 g·L^-1的N，N-二甲基五羥色胺對照品溶液；精密稱取蟾蜍噻嚀對照品適量，50%乙醇溶解，得0.168 g·L^-1的蟾蜍噻嚀對照品溶液；依次精密量取上述3種對照品溶液適量，混合、稀釋定容，得質量濃度分別為79.6，67.2，74.4 mg·L^-1的五羥色胺鹽酸鹽、蟾蜍噻嚀和N，N-二甲基五羥色胺混合對照品溶液，上述混合對照品溶液再次稀釋得質量濃度分別為39.8，33.6，37.2 mg·L^-1的混合對照品溶液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　分別精密稱取N-甲基五羥色胺和N，N，N-三甲基五羥色胺適量，甲醇溶解，得質量濃度分別為0.778，0.410 g·L^-1的2種對照品溶液；依次精密量取上述2種對照品溶液適量，混合、稀釋定容，得質量濃度分別為194，205 mg·L^-1的N-甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺混合對照品溶液；上述混合對照品溶液依次稀釋得到一系列質量濃度的混合對照品溶液，分別為N-甲基五羥色胺97.3，77.8，48.6，38.9，24.3，19.5，9.72 mg·L^-1，N，N，N-三甲基五羥色胺103，82.0，51.5，41.0，25.7，20.5，10.3 mg·L^-1，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　2.1.3線性關系精密吸取五羥色胺鹽酸鹽、蟾蜍噻嚀和N，N-二甲基五羥色胺混合對照品溶液2，4，6，8，10，15，20 μL進樣分析，以進樣質量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸處理，得五羥色胺、N，N-二甲基五羥色胺和蟾蜍噻嚀的回歸方程及線性范圍。精密吸取N-甲基五羥色胺、N，N，N-三甲基五羥色胺系列混合對照品溶液各10 μL，進樣分析，以質量濃度（g·L^-1）為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸處理，得N-甲基五羥色胺和N，N，N-三甲基五羥色胺的回歸方程及線性范圍，見表1。

相關熱詞搜索：吲哚 生物堿 蟾蜍 含量 成分