實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案

　 1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

　1. 稱量121.1 g Tris 置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的 pH 值。

　PH值

　濃 HCl

　7.4

　約70ml

　7.6

　約60ml

　8.0

　約42ml

　4. 將溶液定容至1 L。

　5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。

　2)10×TE Buffer(pH7.4, 7.6, 8.0) 組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L 配制方法：

　1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。

　1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）

　100ml

　500mM EDTA(PH8.0)

　20ml

　2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，均勻混合。

　3. 將溶液定容至1 L 后，高溫高壓滅菌。

　4. 室溫保存。

　3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 組份濃度：1.5 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法：

　1. 稱量181.7 g Tris 置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至8.8。

　4. 將溶液定容至1 L。

　5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。

　4)3 M 醋酸鈉(pH5.2) 組份濃度：3M 醋酸鈉 配制量：100ml 配制方法：

　1.稱量40.8g NaAc·3H 2 O 置于100-200ml 燒杯中，加入月40ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙?2.加入冰醋酸調(diào)節(jié) pH 值至5.2 3.加去離子水將溶液定容至100ml

　4高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　5)PBS Buffer 組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L 配制方法：

　1. 稱量下列試劑，置于1 L 燒杯中。

　NaCl

　8g

　KCl

　0.2g

　Na2 HPO4

　1.42g

　KH 2PO4

　0.27g

　2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

　4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：上述 PBS Buffer 中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

　6)10 M 醋酸銨 組份濃度：10 M 醋酸銨

　配制量：100 ml 配制方法：

　1. 稱量77.1 g 醋酸銨置于100～200 ml 燒杯中，加入約30 ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>

　2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

　3. 使用0.22 mm 濾膜過(guò)濾除菌。

　4. 密封瓶口于室溫保存。

　注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

　7) 苯酚/ 氯仿/ 異戊醇(25 : 24 : 1) 配制方法：

　1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊

　醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。

　2. 配制方法：將 Tris-HCl 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

　8 ）10 ％ (W/V) SDS 組份濃度：10％ (W/V)SDS 配制量：100ml 配制方法：

　1.稱量10g 高純度的 SDS 置于100-200ml 燒杯中，加入約80ml 的去離子水，68℃加入溶解 2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至7.2 3.將溶液定容至100ml 后，室溫保存。

　9 ）2 N NaOH 組份濃度：2 N NaOH 配制量：100 ml 配制方法：

　1. 量取80 ml 去離子水置于100～200 ml 塑料燒杯中（NaOH 溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

　2. 稱取8 g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

　3. 待 NaOH 完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。

　4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

　10 ）2.5 N HCl 組份濃度：2.5 N HCl 配制量：100 ml 配制方法：

　1. 在78.4 ml 的去離子水中加入21.6 ml 的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。

　2. 室溫保存。

　11 ）5 M NaCl 組份濃度：5 M NaCl 配制量：1 L 配制方法：

　1. 稱取292.2 g NaCl 置于1 L 燒杯中，加入約800 ml 的去離子水后攪拌溶解。

　2. 加去離子水將溶液定容至1 L 后，適量分成小份。

　3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　11 ）20 ％ (W/V) Glucose 組份濃度：20％ (W/V) Glucose 配制量：100 ml 配制方法：

　1. 稱取20 g Glucose 置于100～200 ml 燒杯中，加入約80 ml 的去離子水后，攪拌溶解。

　2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

　3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　12 ）SolutionI( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L 配制方法：

　1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。

　1M Tris-HCl（PH8.0）

　25ml

　0.5M EDTA（PH8.0）

　20ml

　20 ％Glucose（ 1.1145ml

　M）

　dH 2 O

　910ml

　2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　3. 使用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A（20 mg/ml)。

　13 ）SolutionII( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS 配制量：500ml 配制方法：

　1.量取下列溶液，置于500ml 燒杯中 10％ SDS 50ml 2N NaOH 50ml 2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻 3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月 注意：SDS 易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?/p>

　14 ）SolutionIII( 質(zhì)粒提取用) 組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量：500 ml 配制方法：

　1. 稱量下列試劑，置于500 ml 燒杯中。

　KOAc

　 147g

　CH 3 COOH

　57.5ml

　2. 加入300 ml 去離子水后攪拌溶解。

　3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。

　4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　15 ）0.5 M EDTA(pH8.0) 組份濃度：0.5 M EDTA 配制量：1 L 配制方法：

　稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?/p>

　3. 用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至8.0（約20 g NaOH)。

　注意：pH 值至8.0時(shí)，EDTA 才能完全溶解。

　4. 加去離子水將溶液定容至1 L。

　5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。

　6. 室溫保存。

　16 ）1 M DTT

　組份濃度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：

　1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。

　2. 加20 ml 的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm 濾器過(guò)濾除菌。

　3. 適量分成小份后，-20℃保存。

　17 ）10 mM ATP 組份濃度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：

　1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。

　2. 加20 ml 的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。

　3. 適量分成小份后，-20℃保存。

　一.常用貯液與溶液

　1mol/L 亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

　1mol/L 精胺（Spermine）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

　10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g 乙酸胺溶解于水中，加

　水定容至1L 后，用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。

　10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（組分 V 或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú) DNA 酶）于9.5ml 水中（為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加32.4ml 水，分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg 的二硫蘇糖醇 至微量離心管，加0.65ml 的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。

　8mol/L 乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

　1mol/L 氯化鉀（KCl）：溶解7.46g 氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

　3mol/L 乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g 的三水乙酸鈉于約90ml 水中，用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至5.2，再加水定容到100ml。

　0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形成 EDTA 的三鈉鹽�；蚍Q取186.1g 的 Na2EDTA·2H2O 和20g的 NaOH，并溶于水中，定容至1L。

　1mol/L HEPES：將23.8gHEPES 溶于約90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

　1mol/L HCl：加8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。

　25mg/ml IPGT：溶解250mg 的 IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份貯存于-20℃。

　1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O 于足量的水中，定容到100ml。

　100mmol/L PMSF：溶解174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹 或貯存于-20℃。

　20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：將200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　10mg/mlRnase（無(wú) DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg 的胰蛋白 RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 Tris－HCl 調(diào) pH 至7.5，于-20℃貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）

　5mol/L 氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g 氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。

　10N 氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g 氫氧化鈉顆粒于約0.9L 水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

　10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L 的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

　2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中

　使終體積為100ml。

　100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA 的試劑瓶中加入100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）

　2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg 的 X－gal于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。

　100×Denhardt 試劑（Denhardt"s regent）

　成分及終濃度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　2 ％ 聚 蔗 糖（Ficoll，400型）?2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）?2％BSA（組分V）?水

　2g?2g?2g?加水至總體積為100ml

　依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。

　10×標(biāo)準(zhǔn) DNA 連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　0.5mol/L Tris-HCl?100mmol/L MgCl2?100mmol/L DTT?2mmol/L ATP?5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）?0.5mg/ml BSA（組分 V）（可選）?水

　5ml 1mol/L 貯液?1ml 1mol/L 貯液?1ml 1mol/L 貯液?200ul 100 mmol/L 貯液?50ul 1 mmol/L 貯液?0.5ml 10 mg/mL 貯液?2.25ml

　 將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。

　100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

　可以購(gòu)買(mǎi)到100mmol/L 純 dNTPs 貯液，-80℃可貯存至少6個(gè)月。

　10mmol/L dNTP 混合液

　成分及終濃度

　配制20ul溶液各成分的用量

　10mmol/L dATP?10mmol/L 2ul 100 mmol/L dATP 貯液?2ul 100 mmol/L dCTP 貯液?2ul 100 mmol/L dGTP 貯液?2ul 100 mmol/L dTTP 貯液?12ul

　dCTP?10mmol/L dGTP?10mmol/L dTTP?水

　20％PEG 8000/2.5M NaCl

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　質(zhì) 量 濃 度 為20％聚乙二醇?2.5mol/L 氯化鈉?水

　20g?50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉?補(bǔ)足100ml

　 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。

　20×SSC

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　300mmol/L 檸 88.2g?175.3g?補(bǔ)足1L

　檬酸三鈉（二水）?3mol/L 氯化鈉?水

　 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L 水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào) pH 為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。

　DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的 DEPC失活。DEPC 會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用 DEPC 處理 Tris 緩沖液。

　甲酰胺（deionized formamide）

　直接購(gòu)買(mǎi)或加 Dowex XG8 混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹(shù)脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。

　磷酸緩沖液（phosphate buffer）

　按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g 于足量水中，使終體

　積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g 于足量水中使終體積為1L。

　1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）

　1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）

　最終 pH 值

　877?850?815?775?735?685?625?565?510?450?390?330?280

　123?150?185?225?265?315?375?435?490?550?610?670?720

　6.0?6.1?6.2?6.3?6.4?6.5?6.6?6.7?6.8?6.9?7.0?7.1?7.2

　TE（用于懸浮和貯存 DNA）

　成分及終濃度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　10mmol/L Tris －HCl?1mmol/L EDTA?水

　1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）?200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）?98.8ml

　Tris 緩沖液（Tris-HCl buffer）

　將121g 的 Tris 堿溶解于約0.9L 水中，再根據(jù)所要求的 pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。

　濃鹽酸的體積（ml）

　pH

　8.6?14?21?28.5?38?46?56?66?71.3?76

　9.0?8.8?8.6?8.4?8.2?8.0?7.8?7.6?7.4?7.2

　二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

　電泳緩沖液

　50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　2mol/L Tris 堿?1mol/L 乙 酸?100 mmol/L EDTA?水

　242g?57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）?200ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）?補(bǔ)足1L

　5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　445 mmol/L Tris 堿 ?445 mmol/L 硼 酸鹽?10 mmol/L EDTA?水

　54g?27.5g 硼酸?20 ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）?補(bǔ)足1L

　染料

　1％溴酚藍(lán)（bromophenol blue）

　加1g 水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

　1％二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）

　溶解1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到100ml。

　10mg/ml 的溴化乙錠（ethidium bromide）

　小心稱取1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

　凝膠上樣液（gel loading solutions）

　6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.3 N 氫氧化鈉?6 mmol/L 300ul 10N 氫 氧 化 鈉 ?120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?1.8g?15mg?25mg?補(bǔ)足到10ml

　EDTA?18％聚蔗糖（400型）?0.15％溴甲酚綠?0.25％二甲苯青 FF?水

　6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15 ％ 溴 酚 藍(lán)?0.15％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?15％聚蔗糖（400型）?水

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)?1.5ml 1％二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?1.5g?補(bǔ)足到10ml

　6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.25 ％ 溴 酚 藍(lán)?0.25％二甲苯青FF?15 ％ 聚 蔗 糖2.5ml 1％溴酚藍(lán)?2.5ml 1％二甲苯青 FF?1.5g?補(bǔ)足到10ml

�。�400型）?水

　6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15 ％ 溴 酚 藍(lán)?0.15％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?50％甘油?水

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)?1.5ml 1％二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?3ml?3.9ml

　6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15 ％ 溴 酚 藍(lán)?0.15％二甲苯青FF?5 mmol/L EDTA?40％聚蔗糖?水

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)?1.5ml 1％二甲苯青 FF?100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）?4g?補(bǔ)足到10ml

　 10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.2％溴酚藍(lán)?0.2％二甲苯青 FF?200 mmol/L EDTA?0.1 ％SDS?50％甘油?水

　20mg?20mg?4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)?100ul 10％ SDS?5ml?補(bǔ)足到10ml

　三.常用培養(yǎng)基

　LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　10g

　酵母提取物

　5g

　氯化鈉

　10g

　如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整 pH 至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　SOB 培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　5g

　氯化鈉

　0.5g

　1 mol/L 氯化鉀

　2.5ml

　 用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml 的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂。

　SOC 培養(yǎng)基 成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂外，再加2ml 滅菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。

　TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　12g

　酵母提取物

　24g

　甘油

　4ml

　各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml 滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的 溶 液 （ 2.31g 的 KH2PO4 和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。

　2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　16g

　酵母提取物

　10g

　氯化鈉

　4ml

　如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整 pH 至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　YPD 培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　10g

　葡萄糖

　20g

　用水補(bǔ)足體積為1L 后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g 色氨酸，因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉。

　四.常用抗生素

　氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

　溶解0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml 終濃度與100ug/ml 氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

　溶解100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

　溶解250mg 氯霉素足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml）

　溶解0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

　溶解50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）?溶解100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見(jiàn)光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

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