【摘要】 目的 采用HPLC法對(duì)湖南省4個(gè)產(chǎn)地絞股藍(lán)中人參皂苷Rb1含量進(jìn)行測(cè)定。方法 采用甲醇回流提取，高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），乙腈-0.5%磷酸（20：80）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。結(jié)果 人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r=0.9996；人參皂苷Rb1平均回收率：97.56%，RSD為1.05%。結(jié)論 該方法可靠、便捷，可以作為控制絞股藍(lán)藥材質(zhì)量的方法。同時(shí)，不同產(chǎn)地絞藍(lán)中總皂苷的含量存在差異，以湖南綏寧產(chǎn)絞股藍(lán)中總皂苷含量（0.53%）最高。
　　【關(guān)鍵詞】 絞股藍(lán)；人參皂苷Rb1；高效液相色譜法
　　文章編號(hào)：1004-7484（2013）-02-0557-02
　　絞股藍(lán)^[1-3]（Gynostemma pentaphyllum）為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，有“南方人參”和“第二人參”的美譽(yù)，別名小苦藥、公羅鍋底、五葉藤、遍地生根、甘茶蔓等。20世紀(jì)70年代末至80年代初期，日本著名的絞股藍(lán)研究專(zhuān)家永井正博等^[4]先后在絞股藍(lán)中發(fā)現(xiàn)了人參皂苷，并分離得到了80多種皂苷類(lèi)物質(zhì)，確定其為四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型結(jié)構(gòu)，其中4種皂苷與4種人參皂苷同物異名。已證明絞股藍(lán)具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預(yù)防冠心病、抑制癌細(xì)胞、調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能。2002年衛(wèi)生部將絞股藍(lán)列為新資源藥食同源保健品。絞股藍(lán)的黃酮、多糖、微量元素等都具有很好的保健功效，但其主要藥效成分是絞股藍(lán)皂苷。本文采用高效液相色譜法對(duì)絞股藍(lán)中人參皂苷Rb1的含量進(jìn)行了測(cè)定，以期為絞股藍(lán)的應(yīng)用提供一些依據(jù)。
　　1 儀器、試劑與藥材
　　LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；島津SPD-10A檢測(cè)器；N2000色譜工作站；HX-06型超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；AE-240型電子天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司）。人參皂苷Rb1購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)：704-200114。甲醇、乙腈（色譜純?cè)噭�，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供）。藥材采自湖南綏寧、桑植、瀏陽(yáng)、平江，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.5%磷酸（20：80）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計(jì)算不得低于5000。
　　2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rb15.15mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
　　2.3 供試品溶液的制備 取產(chǎn)自湖南綏寧絞股藍(lán)藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
　　2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷Rb1（C=0.515mg/ml）對(duì)照品溶液1、3、5、7、9、11μl進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Y=45300x-652.28，r=0.9996。結(jié)果表明人參皂苷Rb1在0.515-5.665μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
　　2.5 精密度試驗(yàn) 取絞股藍(lán)藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算RSD為1.2%。
　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.5項(xiàng)下的供試品溶液，精密吸取10μl，于0、4、8、12、24小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積。計(jì)算，RSD為1.6%，說(shuō)明24h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材制成供試品溶液6份，測(cè)定含量。結(jié)果RSD1.6%，說(shuō)明方法重復(fù)性好。
　　2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的本品0.3g，每份加入人參皂苷Rb1約1mg，按供試品測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定。人參皂苷Rb1平均回收率為97.56%，RSD為1.05%。結(jié)果見(jiàn)表1。
　　2.9 樣品含量測(cè)定 取采自湖南綏寧、桑植、瀏陽(yáng)、平江的絞股藍(lán)藥材，按供試品溶液的制備方法制備成供試液，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得，結(jié)果見(jiàn)表2、圖1、圖2。
　　3 討論
　　3.1 絞股藍(lán)具有減肥、降血脂、調(diào)血壓、延緩衰老、預(yù)防冠心病、抑制癌細(xì)胞、調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能，其中絞股藍(lán)皂苷是其主要藥效成分。目前對(duì)絞股藍(lán)的研究多數(shù)集中在絞股藍(lán)總皂苷上，其中人參皂苷Rb1是皂苷的主要成分之一，文獻(xiàn)報(bào)道，主要采用紫外分光光度法測(cè)定絞股藍(lán)總皂苷。我們選擇了人參皂苷Rb1作為絞股藍(lán)藥材含量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法，經(jīng)方法學(xué)考察和湖南省4個(gè)不同產(chǎn)地絞股藍(lán)的測(cè)定，表明該方法可靠、便捷，可以作為控制絞股藍(lán)藥材的質(zhì)量方法。
　　3.2 絞股藍(lán)皂苷的含量與品種、產(chǎn)地氣候、土壤條件、采收時(shí)間、采樣部位等有很大關(guān)系，對(duì)湖南省4個(gè)不同產(chǎn)地的絞股藍(lán)全草進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明不同地區(qū)絞股藍(lán)的人參皂苷Rb1含量有較大差異，其中以湖南綏寧縣產(chǎn)質(zhì)量好。
　　參考文獻(xiàn)
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　　[4] 黃敏珠，王棟，尹忠臣，等.紫外分光光度法測(cè)定絞股藍(lán)中絞股藍(lán)總苷的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（18）：2410.

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