實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案

　1)1 M Tris- - HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

　 組份濃度：1 M Tris-HCl

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 稱量121.1 g Tris 置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的 pH 值。

　PH 值

　濃 HCl

　7.4

　約70ml

　7.6

　約60ml

　8.0

　約42ml

　4. 將溶液定容至1 L。

　5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。

　2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

　組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。

　1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）

　100ml

　500mM EDTA(PH8.0)

　20ml

　2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，均勻混合。

　3. 將溶液定容至1 L 后，高溫高壓滅菌。

　4. 室溫保存。

　3)1.5 M Tris- - HCl (pH8.8)

　 組份濃度：1.5 M Tris-HCl

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 稱量181.7 g Tris 置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至8.8。

　4. 將溶液定容至1 L。

　5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的 pH 值大約降低0.03個(gè)單位。

　4)3 M 醋酸鈉 (pH5.2)

　 組份濃度：3M 醋酸鈉

　配制量：100ml

　配制方法：

　1.稱量40.8g NaAc〃3H2O 置于100-200ml 燒杯中，加入月40ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙?/p>

　2.加入冰醋酸調(diào)節(jié) pH 值至5.2

　3.加去離子水將溶液定容至100ml

　4高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　5)PBS Buffer

　組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 稱量下列試劑，置于1 L 燒杯中。

　NaCl

　8g

　KCl

　0.2g

　Na2HPO4

　1.42g

　KH2PO4

　0.27g

　2. 向燒杯中加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

　3. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

　4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。

　注意：上述 PBS Buffer 中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

　6)10 M 醋酸銨

　組份濃度：10 M 醋酸銨

　配制量：100 ml

　配制方法：

　1. 稱量77.1 g 醋酸銨置于100～200 ml 燒杯中，加入約30 ml 的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/p>

　2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

　3. 使用0.22 mm 濾膜過(guò)濾除菌。

　4. 密封瓶口于室溫保存。

　注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。

　) 7) 苯酚/ / 氯仿/ / 異戊醇

　(25 : 24 : 1)

　 配制方法：

　1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。

　2. 配制方法：將 Tris-HCl 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

　8 8 ）

　10 ％

　(W/V) SDS

　 組份濃度：10％ (W/V)SDS

　配制量：100ml

　配制方法：

　1.稱量10g 高純度的 SDS 置于100-200ml 燒杯中，加入約80ml 的去離子水，68℃加入溶解

　2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié) pH 值至7.2

　3.將溶液定容至100ml 后，室溫保存。

　9 9 ）

　2 N NaOH

　 組份濃度：2 N NaOH

　配制量：100 ml

　配制方法：

　1. 量取80 ml 去離子水置于100～200 ml 塑料燒杯中（NaOH 溶解過(guò)程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。

　2. 稱取8 g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。

　3. 待 NaOH 完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。

　4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。

　10 ）

　2.5 N HCl

　 組份濃度：2.5 N HCl

　配制量：100 ml

　配制方法：

　1. 在78.4 ml 的去離子水中加入21.6 ml 的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。

　2. 室溫保存。

　11 ）

　5 M NaCl

　 組份濃度：5 M NaCl

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 稱取292.2 g NaCl 置于1 L 燒杯中，加入約800 ml 的去離子水后攪拌溶解。

　2. 加去離子水將溶液定容至1 L 后，適量分成小份。

　3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　11 ）

　20 ％

　(W/V) Glucose

　 組份濃度：20％ (W/V) Glucose

　配制量：100 ml

　配制方法：

　1. 稱取20 g Glucose 置于100～200 ml 燒杯中，加入約80 ml 的去離子水后，攪拌溶解。

　2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

　3. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　12 ）

　Solution I( 質(zhì)粒提取用) )

　 組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

　配制量：1 L

　 配制方法：

　1. 量取下列溶液，置于1 L 燒杯中。

　1M Tris-HCl（PH8.0）

　25ml

　0.5M EDTA（PH8.0）

　20ml

　20％Glucose（1.11M）

　45ml

　dH2O

　910ml

　2. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　3. 使用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A（20 mg/ml)。

　13 ）

　Solution II( 質(zhì)粒提取用) )

　 組份濃度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS

　配制量：500ml

　配制方法：

　1.量取下列溶液，置于500ml 燒杯中

　10％ SDS 50ml

　2N NaOH 50ml

　2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻

　3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月

　注意：SDS 易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?/p>

　14 ）

　Solution III( 質(zhì)粒提取用) )

　 組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

　配制量：500 ml

　配制方法：

　1. 稱量下列試劑，置于500 ml 燒杯中。

　KOAc

　147g

　CH3COOH

　57.5ml

　2. 加入300 ml 去離子水后攪拌溶解。

　3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。

　4. 高溫高壓滅菌后，4℃保存。

　15 ）

　0.5 M EDTA(pH8.0)

　 組份濃度：0.5 M EDTA

　配制量：1 L

　 配制方法：

　稱取186.1 g Na2EDTA〃2H2O，置于1 L 燒杯中。

　2. 加入約800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?/p>

　3. 用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至8.0（約20 g NaOH)。

　注意：pH 值至8.0時(shí)，EDTA 才能完全溶解。

　4. 加去離子水將溶液定容至1 L。

　5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。

　6. 室溫保存。

　16 ）

　1 M DTT

　組份濃度：

　1 M DTT

　 配制量：

　20 ml

　 配制方法：

　1. 稱取 3.09 g DTT ，加入到l 50 ml 塑料離心管內(nèi)。

　2. 加l 20 ml 的 0.01 M NaOAc （ pH5.2) ，溶解后使用 0.22 mm 濾器過(guò)濾除菌。

　3. 適量分成小份后，- - 20℃ 保存。

　17 ）

　10 mM A TP

　組份濃度：10 mM ATP

　配制量：20 ml

　配制方法：

　1. 稱取121 mg Na2ATP〃3H2O，加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。

　2. 加20 ml 的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。

　3. 適量分成小份后，-20℃保存。

　一.常用貯液與溶液

　1mol/L 亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

　1mol/L 精胺（Spermine）：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。

　10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用0.22um 孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。

　10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（組分 V 或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú) DNA 酶）于9.5ml水中（為減少變性，

　須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加32.4ml 水，分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇

　至微量離心管，加0.65ml 的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。

　8mol/L 乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

　1mol/L 氯化鉀（KCl）：溶解7.46g 氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。

　3mol/L 乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g 的三水乙酸鈉于約90ml 水中，用冰乙酸調(diào)溶液的 pH 至5.2，再加水定容到100ml。

　0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形成 EDTA 的三鈉鹽�；蚍Q取186.1g 的 Na2EDTA〃2H2O 和20g 的 NaOH，并溶于水中，定容至1L。

　1mol/L HEPES：將23.8gHEPES 溶于約90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

　1mol/L HCl：加8.6ml 的濃鹽酸至91.4ml 的水中。

　25mg/ml IPGT：溶解250mg 的 IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份貯存于-20℃。

　1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2〃6H2O 于足量的水中，定容到100ml。

　100mmol/L PMSF：溶解174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹

　或貯存于-20℃。

　20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：將200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml 水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　10mg/mlRnase（無(wú) DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg 的胰蛋白 RNA 酶于1ml 的10mmol/L 的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使 DNA 酶失活。用1mol/L 的 Tris－HCl 調(diào) pH 至7.5，于-20℃貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）

　5mol/L 氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g 氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。

　10N 氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g 氫氧化鈉顆粒于約0.9L 水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

　10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L 的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

　2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。

　100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA 的試劑瓶中加入100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）

　2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg 的 X－gal 于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。

　100×Denhardt 試劑（Denhardt"s regent）

　成分及終濃度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　2％聚蔗糖（Ficoll，400型）

　2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

　2％BSA（組分 V）

　水

　2g

　 2g

　 2g

　 加水至總體積為100ml

　依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。

　10×標(biāo)準(zhǔn) DNA 連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　0.5mol/L Tris-HCl

　100mmol/L MgCl2

　100mmol/L DTT

　2mmol/L ATP

　5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）

　0.5mg/ml BSA（組分 V）（可選）

　水

　5ml 1mol/L 貯液

　1ml 1mol/L 貯液

　1ml 1mol/L 貯液

　200ul 100 mmol/L 貯液

　50ul 1 mmol/L 貯液

　0.5ml 10 mg/mL 貯液

　2.25ml

　 將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。

　100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

　可以購(gòu)買到100mmol/L 純 dNTPs 貯液，-80℃可貯存至少6個(gè)月。

　10mmol/L dNTP 混合液

　成分及終濃度

　配制20ul 溶液各成分的用量

　10mmol/L dATP

　10mmol/L dCTP

　10mmol/L dGTP

　10mmol/L dTTP

　水

　2ul 100 mmol/L dATP 貯液

　2ul 100 mmol/L dCTP 貯液

　2ul 100 mmol/L dGTP 貯液

　2ul 100 mmol/L dTTP 貯液

　12ul

　20％PEG 8000/2.5M NaCl

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分的用量

　質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇

　2.5mol/L 氯化鈉

　水

　20g

　 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉

　補(bǔ)足100ml

　 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。

　20×SSC

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）

　3mol/L 氯化鈉

　水

　88.2g

　 175.3g

　 補(bǔ)足1L

　 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L 水中，加幾滴10N NaOH 溶液調(diào) pH 為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。

　DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水

　加100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的 DEPC 失活。DEPC 會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用 DEPC 處理 Tris 緩沖液。

　甲酰胺（deionized formamide）

　直接購(gòu)買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。

　磷酸緩沖液（phosphate buffer）

　按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4〃H2O）貯液：溶解138g 于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g 于足量水中使終體積為1L。

　1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）

　1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）

　最終 pH 值

　877

　123

　6.0

　850

　815

　775

　735

　685

　625

　565

　510

　450

　390

　330

　280

　150

　185

　225

　265

　315

　375

　435

　490

　550

　610

　670

　720

　6.1

　6.2

　6.3

　6.4

　6.5

　6.6

　6.7

　6.8

　6.9

　7.0

　7.1

　7.2

　TE（用于懸浮和貯存 DNA）

　成分及終濃度

　配制100ml 溶液各成分的用量

　10mmol/L Tris－HCl

　1mmol/L EDTA

　水

　1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

　200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

　98.8ml

　Tris 緩沖液（Tris-HCl buffer）

　將121g 的 Tris 堿溶解于約0.9L 水中，再根據(jù)所要求的 pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。

　濃鹽酸的體積（ml）

　pH

　8.6

　14

　21

　28.5

　38

　46

　56

　66

　71.3

　76

　9.0

　8.8

　8.6

　8.4

　8.2

　8.0

　7.8

　7.6

　7.4

　7.2

　二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

　電泳緩沖液

　50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　2mol/L Tris 堿

　1mol/L 乙酸

　100 mmol/L EDTA

　水

　242g

　 57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）

　200ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

　補(bǔ)足1L

　5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

　成分及終濃度

　配制1L 溶液各成分的用量

　445 mmol/L Tris 堿

　445 mmol/L 硼酸鹽

　10 mmol/L EDTA

　54g

　 27.5g 硼酸

　20 ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）

　水

　補(bǔ)足1L

　染料

　1％溴酚藍(lán)（bromophenol blue）

　加1g 水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

　1％二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）

　溶解1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到100ml。

　10mg/ml 的溴化乙錠（ethidium bromide）

　小心稱取1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

　凝膠上樣液（gel loading solutions）

　6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.3 N 氫氧化鈉

　6 mmol/L EDTA

　18％聚蔗糖（400型）

　0.15％溴甲酚綠

　0.25％二甲苯青 FF

　水

　300ul 10N 氫氧化鈉

　120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

　1.8g

　15mg

　25mg

　補(bǔ)足到10ml

　6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15％溴酚藍(lán)

　0.15％二甲苯青 FF

　5 mmol/L EDTA

　15％聚蔗糖（400型）

　水

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)

　1.5ml 1％二甲苯青 FF

　100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

　1.5g

　補(bǔ)足到10ml

　6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.25％溴酚藍(lán)

　0.25％二甲苯青 FF

　15％聚蔗糖（400型）

　水

　2.5ml 1％溴酚藍(lán)

　2.5ml 1％二甲苯青 FF

　1.5g

　補(bǔ)足到10ml

　6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15％溴酚藍(lán)

　0.15％二甲苯青 FF

　5 mmol/L EDTA

　50％甘油

　水

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)

　1.5ml 1％二甲苯青 FF

　100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

　3ml

　3.9ml

　6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.15％溴酚藍(lán)

　0.15％二甲苯青 FF

　5 mmol/L EDTA

　1.5ml 1％溴酚藍(lán)

　1.5ml 1％二甲苯青 FF

　100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

　40％聚蔗糖

　水

　4g

　補(bǔ)足到10ml

　10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

　成分及終濃度

　配制10ml 溶液各成分用量

　0.2％溴酚藍(lán)

　0.2％二甲苯青 FF

　200 mmol/L EDTA

　0.1％SDS

　50％甘油

　水

　20mg

　20mg

　4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

　100ul 10％ SDS

　5ml

　補(bǔ)足到10ml

　三.常用培養(yǎng)基

　LB 培養(yǎng)基

　將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　10g

　酵母提取物

　5g

　氯化鈉

　10g

　如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整 pH 至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　SOB 培養(yǎng)基

　將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　5g

　氯化鈉

　0.5g

　1 mol/L 氯化鉀

　2.5ml

　 用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml 的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂。

　SOC 培養(yǎng)基

　成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml 的小份中加1ml 滅過(guò)菌的1mol/L 氯化鎂外，再加2ml 滅菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過(guò)濾除菌）。

　TB 培養(yǎng)基

　將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　12g

　酵母提取物

　24g

　甘油

　4ml

　各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml 滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g 的 KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um 的濾膜過(guò)濾除菌）。

　2×YT 培養(yǎng)基

　將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　16g

　酵母提取物

　10g

　氯化鈉

　4ml

　如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整 pH 至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　YPD 培養(yǎng)基

　將下列組分溶解在0.9L 水中：

　蛋白胨

　20g

　酵母提取物

　10g

　葡萄糖

　20g

　用水補(bǔ)足體積為1L 后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g 色氨酸，因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉。

　四.常用抗生素

　氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

　溶解0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

　溶解1g 甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml 終濃度與100ug/ml 氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

　溶解100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

　溶解250mg 氯霉素足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml）

　溶解0.5g 鏈霉素硫酸鹽于足量的無(wú)水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

　溶解50mg 萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

　四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）

　溶解100mg 四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無(wú)堿的四環(huán)素溶于無(wú)水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml 的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

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