ICS

　 DB43 湖 南 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) DB43/T—2020

　苧麻根腐線蟲病綜合防控技術(shù)規(guī)程 Regulation for Integrated Prevention and Control Technology of Ramie root rot nematode disease

　 2020

　 -

　 發(fā)布 2020-

　-

　實(shí)施 湖南省市場監(jiān)督管理局

　發(fā) 布

　DB43/T—2020

　I 目

　次

　前

　言 ............................................................................. 1 1 范圍 ............................................................................... 2 2 規(guī)范性引用文件 ..................................................................... 2 3 術(shù)語和定義 ......................................................................... 2 4 苧麻根腐線蟲病發(fā)生流行規(guī)律 ......................................................... 2 5 苧麻根腐線蟲病害診斷 ............................................................... 3 6 苧麻根腐線蟲的綜合防控方法 ......................................................... 3 7 建立防治檔案 ....................................................................... 4 附錄 A（資料性附錄）

　苧麻根腐線蟲病癥狀 .............................................. 5 附錄 B（規(guī)范性附錄）

　苧麻根腐線蟲形態(tài)學(xué)鑒定、分子生物學(xué)檢測方法 ....................... 6 附

　錄

　C （資料性附錄）

　苧麻根腐線蟲病防治檔案 ...................................... 8

　DB43/T—2020 1 前

　言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。

　請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。

　本標(biāo)準(zhǔn)由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。

　本標(biāo)準(zhǔn)由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

　本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：湖南省植物保護(hù)研究所。

　本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：朱春暉、張德詠、劉勇、成飛雪、程菊娥、解嘯、孫書娥、王東偉

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　 苧麻根腐線蟲病綜合防控技術(shù)規(guī)程 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了苧麻根腐線蟲病的術(shù)語和定義、發(fā)生流行規(guī)律、病害診斷、綜合防控方法、防治檔案等技術(shù)要求。

　本標(biāo)準(zhǔn)適用于苧麻根腐線蟲病的綜合防控。

　2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

　GB 4285

　 農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn) GB 8321

　 農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則 3 術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

　3.1 綜合防控技術(shù) Integrated Prevention and Control Technology 綜合防控是基于“預(yù)防為主、綜合防治”的植保方針，以確保農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境安全為目標(biāo)，以減少農(nóng)藥使用為目的，優(yōu)先采取生態(tài)調(diào)控、生物防治、物理防治和科學(xué)用藥等資源節(jié)約型、環(huán)境友好型技術(shù)來控制農(nóng)作物病蟲害的植物保護(hù)措施。

　3.2 苧麻根腐線蟲病 Ramie Root Rot Nematode Disease 由咖啡短體線蟲引起的苧麻根腐線蟲病。

　3.3 陽性對照 Positive Control 凡是確定可以出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果的處理，稱為陽性對照。

　3.4 陰性對照 Negative Control 凡是確定不會出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果的處理，稱為陰性對照。

　3.5 空白對照 Blank Control 凡是不加處理因素的處理，稱為空白對照。

　4 苧麻根腐線蟲病發(fā)生流行規(guī)律

　DB43/T—2020 3 苧麻根腐線蟲病

　苧麻根腐線蟲病是導(dǎo)致苧麻敗蔸的主要病害，苧麻根腐線蟲的主要病原是咖啡短體線蟲。病原線蟲生活的適宜溫度為25-28℃，田間土壤溫度是影響其孵化和繁殖的重要條件，溫度高于33℃時(shí)繁殖量大大下降，溫度高于40℃或低于4℃時(shí)就很少活動，65℃下10分鐘可導(dǎo)致死亡。苧麻根

　 腐線蟲在干燥或過濕土壤中，活動受到抑制，而地勢高、土壤質(zhì)地疏松、鹽分低土壤適宜線蟲活動，所以砂土土壤往往發(fā)病較重。由于根腐線蟲的入侵，引起根部皮層細(xì)胞產(chǎn)生壞死傷痕，從而極易遭受其它病原菌如鐮刀菌屬（Fusarium）、腐霉屬（Pythium）、以及黑腐霉（Thielaviopsis）等真菌的侵害，形成復(fù)合感染，加重對苧麻的危害。

　5 苧麻根腐線蟲病害診斷 5.1 病害田間診斷 苧麻根腐線蟲病主要是由短體屬線蟲為害而引起的，主要為害苧麻根部，特別是苧麻的蘿卜根。受害麻株初期根常出現(xiàn)黑褐色不規(guī)則病斑，稍凹陷，后漸擴(kuò)大為黑褐色大病斑，并深入木質(zhì)部使之變黑褐色海綿狀朽腐，質(zhì)地疏松似糠狀，病灶交接處常見黑綠色病變。而被害麻兜地上部分常常表現(xiàn)出麻株減少且矮小，葉片發(fā)黃，干旱時(shí)凋萎，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)整根腐爛，麻株枯死。參見附錄A。

　5.2 形態(tài)學(xué)檢測 檢測方法和檢測結(jié)果見附錄B 5.3 分子生物學(xué)檢測 檢測方法和檢測結(jié)果見附錄B 6 苧麻根腐線蟲病的綜合防控方法 6.1 防治原則 苧麻根腐線蟲病的防治以預(yù)防為主，重視農(nóng)業(yè)措施，合理使用農(nóng)藥，進(jìn)行綜合防治。防治方法主要有農(nóng)藝措施、化學(xué)藥劑防治以及生物防治。以“預(yù)防為主，綜合防治”為指導(dǎo)思想，根據(jù)苧麻根腐線蟲的發(fā)生規(guī)律及危害特點(diǎn)，從農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)整體出發(fā)，保護(hù)生物多樣性，優(yōu)化生產(chǎn)環(huán)境，盡可能消滅和減少線蟲來源，盡量減少化學(xué)農(nóng)藥的使用角度開展綜合防控，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)安全、生態(tài)環(huán)境安全和菜產(chǎn)品質(zhì)量安全。

　6.2 農(nóng)業(yè)措施防治 田園衛(wèi)生：在定植前，結(jié)合整地，清除病殘?bào)w，鏟除田間及周邊雜草。及時(shí)拔除病株，帶出田外深埋或燒毀。

　農(nóng)藝措施：進(jìn)行抗性育種，選用抗病品種是防治苧麻根腐線蟲病最直接有效的方法。苧麻不同品種間抗根腐線蟲病差異顯著，如獨(dú)山圓麻、牛耳青和湘苧二號的抗性強(qiáng)而黑皮蔸和黃殼早則較易感病。此外，實(shí)行高壟栽培，適時(shí)開溝排水，降低地下水位，也可有效降低蟲口密度，抑制根腐線蟲的危害。

　6.3 藥劑防治 藥劑使用應(yīng)符合GB 4285和 GB 8321的相關(guān)規(guī)定。

　藥劑防治：對重病麻園有必要進(jìn)行施用化學(xué)藥劑進(jìn)行防治。如選用噻唑膦、辛硫磷、氯唑磷等化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行開溝施藥，或是在苧麻移植前利用棉隆或威百畝進(jìn)行土壤熏蒸。

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　 6.4 生物防治 生物藥、肥防治：隨著環(huán)境保護(hù)意識的加強(qiáng)，苧麻根腐線蟲病的化學(xué)防治也逐步轉(zhuǎn)向生物防治。利用生物農(nóng)藥或微生物肥料抑制苧麻根腐線蟲病的發(fā)生。如用阿維菌素（乳油或顆粒劑）對苧麻根腐線蟲病有較好的防治效治。施用微生物肥料可有效改善苧麻生長的微生態(tài)環(huán)境，使土壤中的有益菌增多，促進(jìn)土壤中有益菌群的形成，這些有益菌群可分泌酶類物質(zhì)，抑制根腐線蟲的存活；同時(shí)，往土壤中施入生物肥可疏松土壤，利于根系的生長，根系健壯，在一定程度上可提高根系的抗線蟲能力等。

　在苧麻的頭麻冒芽期，取苧麻根部的土壤用貝曼漏斗法分離鑒定土壤中的線蟲種類和數(shù)量。用光合細(xì)菌和BT菌劑分別稀釋200倍，混合，用噴霧器噴施苧麻根部，每蔸平均噴施液體100 mL，選在藥后12小時(shí)無雨的當(dāng)天噴藥，每隔5-7天噴施一次，連續(xù)噴施3次。

　頭麻收獲后，取苧麻根部的土壤用貝曼漏斗法分離鑒定土壤中的線蟲種類和數(shù)量。收獲當(dāng)天即可用藥，用光合細(xì)菌和BT菌劑分別稀釋200倍，混合，用噴霧器噴施苧麻根部，每蔸平均噴施液體100 mL，選在藥后12小時(shí)無雨的當(dāng)天噴藥，每隔5-7天噴施一次，連續(xù)噴施3次。

　二麻收獲后，取苧麻根部的土壤用貝曼漏斗法分離鑒定土壤中的線蟲種類和數(shù)量。收獲當(dāng)天即可用藥，用光合細(xì)菌和BT菌劑分別稀釋200倍，混合，用噴霧器噴施苧麻根部，每蔸平均噴施液體100 mL，選在藥后12小時(shí)無雨的當(dāng)天噴藥，每隔5-7天噴施一次，連續(xù)噴施3次。

　苧麻冬培期，一般選在12月底或者1月初，用光合細(xì)菌和BT菌劑分別稀釋200倍，混合，用噴霧器噴施苧麻根部，每蔸平均噴施液體100 mL，選在藥后12小時(shí)無雨的當(dāng)天噴藥。

　7 建立防治檔案 在田間調(diào)查苧麻根腐線蟲病發(fā)生情況時(shí)，具體調(diào)查內(nèi)容參見附錄C。

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　 5 附錄 A （資料性附錄）

　苧麻根腐線蟲病癥狀 苧麻根腐線蟲病主要是由短體屬線蟲為害而引起的，主要為害苧麻根部，特別是苧麻的蘿卜根。受害麻株初期根常出現(xiàn)黑褐色不規(guī)則病斑，稍凹陷，后漸擴(kuò)大為黑褐色大病斑，并深入木質(zhì)部使之變黑褐色海綿狀朽腐，質(zhì)地疏松似糠狀，病灶交接處常見黑綠色病變。而被害麻兜地上部分常常表現(xiàn)出麻株減少且矮小，葉片發(fā)黃，干旱時(shí)凋萎，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)整根腐爛，麻株枯死。（圖 A1）。

　圖 圖 A1

　 苧麻 根腐線蟲病為害癥狀

　( 成飛雪 2009 年攝于湖南省沅江市)

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　 附錄 B （規(guī)范性附錄）

　苧麻根腐線蟲形態(tài)學(xué)鑒定、分子生物學(xué)檢測方法

　一、 苧麻根腐線蟲形態(tài)學(xué)鑒定 土壤中或者根中分離的線蟲顯微鏡下形態(tài)圖為圖 B1。線蟲形態(tài)的大小符合表 B1 數(shù)據(jù)，則為咖啡鍛體線蟲引起的苧麻根腐線蟲病害。

　 表 表 B1 咖啡短體線蟲形態(tài)特征測量值

　測量項(xiàng)目 測量值范圍 雌蟲(mm) 雄蟲(mm) L 體長 0.37-0.69 0.43-0.70 a 體長/最大體寬 17.7-30.5 25.6-40.0 b 體長/體前端至食道與腸連接處的距離 4.0-7.8 4.9-7.0 b´體長/體前端至食道腺末端的距離 3.3-5.1 3.8-4.8 c 體長/尾長 13.7-26.9 12.3-24.0 c´尾長/肛門處體寬 1.8-2.4 2.3-3.5 V 體前端至陰門的距離×100/體長 75.8-84.2

　St (μm)

　口針長度 12.5-17.8 13.8-17.5 圖 圖 B1

　 苧麻 根腐線蟲病 病原咖啡短體線蟲

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　 7 二、 苧麻根腐線蟲分子生物學(xué)鑒定 取病麻兜及周圍土樣，分別采用淺盆法或蔗糖漂浮離心法分離苧麻根樣中或土樣中線蟲。取分離的單條線蟲用滅菌水清洗3次，放于0.2 mLPCR薄壁管中，-20℃冷凍10 min，加小量PKase，65℃消化1 h，95℃滅活10 min，離心上清液作為PCR反應(yīng)模板。引物：5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’和5’-TCCTCCGCTAAATGATATG-3’。94℃ 預(yù)變性4 min，之后94℃變性30 sec，退火溫度62℃ 30 sec，72℃延伸45 sec，28個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。取擴(kuò)增產(chǎn)物8 μL，加入到1.5%瓊脂糖凝膠（100 mL 1.5%瓊脂糖凝膠含有5 µL DNAgreen）的點(diǎn)樣孔內(nèi)。電泳緩沖液1×TAE，120 V，電泳30 min。電泳結(jié)束后，取出瓊脂糖凝膠，通過凝膠成像儀觀察結(jié)果并拍照記錄，擴(kuò)增片段與預(yù)期目標(biāo)條帶大小一致，則結(jié)果判定為陽性，未擴(kuò)增出預(yù)期大小條帶，則結(jié)果判定為陰性；若陽性對照未擴(kuò)增出預(yù)期大小片段或空白對照擴(kuò)增出任何條帶，則檢測結(jié)果失敗，需要重新檢測。進(jìn)一步可以通過克隆擴(kuò)增片段、測序及比較分析，加以確認(rèn)檢測結(jié)果。

　 圖 圖B2

　苧麻根腐線蟲（800 bp ）PCR 檢測（ （M ：Marker,1-4, 陽性，CK ：陰性 ）800bp

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　附

　錄

　C（資料性附錄）

　苧麻根腐線蟲病防治檔案 表 C1 防治檔案記錄表格 類型

　 日期 前茬 作物 病蟲害發(fā)生情況

　曾使用過防治方法防治病害 當(dāng)茬作物 當(dāng)前使用防治方法 病情指數(shù) 線 蟲數(shù)量

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